一种拟穴青蟹基于微卫星标记的系谱认证方法

摘要

本发明涉及一种拟穴青蟹基于微卫星标记的系谱认证方法，包括：（1）基因组DNA提取；（2）微卫星引物的PCR扩增；（3）扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；（4）家系区分。本发明能够克服物理标记的不足，可准确、有效区分拟穴青蟹不同家系来源的个体，适用于家系选育中鉴定混合养殖的多家系来源的不同个体，将促进拟穴青蟹人工选育工作健康、快速发展，具有良好的应用前景。

主权项

一种拟穴青蟹基于微卫星标记的系谱认证方法，包括：（1）取拟穴青蟹肌肉组织100‑150mg，置于500~600μl组织提取液中剪碎，加入终浓度为20~25mg/ml的蛋白酶K和终浓度为100~110μg/ml的RNase A，55~60℃下消化2‑3个小时；用混合液抽提，然后用组织提取液2倍体积的无水乙醇沉淀DNA，再经乙醇洗涤和自然干燥后，溶解于50~60μl TE缓冲液中；最后将DNA浓度稀释为100～110ng/μl，并保存在‑20℃备用；（2）采用微卫星引物对上述得到的待检测个体的DNA进行PCR扩增；（3）采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物，对PCR扩增产物进行染色和显色，根据扩增产物的不同迁移距离确定拟穴青蟹个体的基因型；（4）利用软件对上述拟穴青蟹基因型进行分析得到聚类图谱，用以区分拟穴青蟹个体。