一种分离、纯化相思子毒素的方法及其产品

摘要

本发明公开了分离、纯化云南相思子毒素的方法，包括：将相思子粗毒素上酸化的Sepharose4B亲和层析柱，先用缓冲液洗脱杂蛋白，然后用半乳糖进行梯度洗脱，收集半乳糖梯度洗脱液；浓缩后加样于DEAE-SepharoseFF凝胶面上，洗脱杂蛋白，梯度洗脱，收集梯度洗脱液，浓缩、脱盐，即得。本发明方法利用两次层析就可以得到相思子的两种毒素蛋白纯品，不仅简化了纯化步骤，而且再纯度，产率上均有显著提高，为大规模的纯化奠定了基础。体外抗肿瘤活性试验和动物移植性肿瘤抑制作用试验结果表明，本发明所分离的相思子毒素对Be17402等10余种肿瘤细胞均有很强的抑制作用，能有效的抑制动物移植性肿瘤的增殖活性。

主权项

一种分离、纯化云南相思子(Abrus precatorius L.)毒素P1、P2的方法，包括：(1)用盐酸处理凝胶Sepharose4B 5‑6小时，经洗涤、脱气、平衡后装层析柱，将云南相思子粗毒素溶于pH＝7.4的0.005mol/L PBS初始平衡缓冲液中，以0.3ml/min的速度进入酸化的Sepharose4B亲和层析柱中，先用初始平衡缓冲液，即10mmol/L，pH＝7.4的磷酸盐缓冲液洗脱掉杂蛋白，洗脱流速为0.7ml/min，然后用pH＝7.4，含0‑0.5mol/L半乳糖的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱，收集半乳糖梯度洗脱液的前面两个在280nm处有吸收的峰；(2)将步骤(1)所收集的洗脱液浓缩后加样于DEAE‑SepharoseFF凝胶面上，以0.3ml/min的速度进入凝胶，先用10mmol/L的Tris‑HCL pH为7.0的洗脱平衡液洗脱掉杂蛋白；然后用含0‑0.5mol/L NaCL的10mmol/L Tris‑HCL进行梯度洗脱，洗脱流速为0.8ml/min，分别收集在280nm处有吸收的前两个较大的峰，分别浓缩后，以规格为30×2.0cm的SephadexG‑25为脱盐柱，将浓缩液上脱盐柱后用水洗脱，流速为0.8ml/min，280nm检测，即得P1、P2。