解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白的分离纯化方法

摘要

解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白的分离纯化方法，它涉及一种芽孢杆菌抗菌蛋白的分离纯化方法。它解决了现有蛋白质的分离纯化方法无法获得高纯度的解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白、杂质蛋白多和抗菌蛋白收率低的问题。方法：一、获得抗菌蛋白粗提物；二、阴离子交换层析获得浓缩蛋白；三、分子筛凝胶过滤层析，得到解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白。本发明用于解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白的分离纯化。

主权项

1.解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白的分离纯化方法，其特征在于解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白按以下步骤进行分离纯化：一、取解淀粉芽孢杆菌TF28（Bacillus amyloliquefaciens TF28）发酵液的上清液，所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.4038，保藏日期为2010年7月26日；向上清液中加入固体硫酸铵，至硫酸铵浓度为20%饱和度，然后4℃条件下静置2h，再以6000r/min的速度离心30min，收集离心上清液，向离心上清液中加入固体硫酸铵，至硫酸铵浓度为40%饱和度，收集沉淀，将沉淀溶解在浓度为0.02mol/L、pH值为6.8的磷酸缓冲液中透析并浓缩，得到抗菌蛋白粗提物；二、室温下用液相色谱系统进行Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析，载样缓冲液流速为0.5mL/min，基线走平后上样，待流出峰出现且UV-900紫外光检测值接近基线进行阶梯式梯度洗脱，收集第二个洗脱峰并超滤浓缩，获得浓缩蛋白；三、室温下用液相色谱系统进行Superdex 75分子筛凝胶过滤层析，上样缓冲液流速为0.4mL/min，基线走平后上样，收集第一个吸收峰，得到解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白；步骤二中上样样品为抗菌蛋白粗提物；步骤二中的载样缓冲液是pH值为7.6、浓度为0.05mol/L的Tris-HCl缓冲液；步骤二中阶梯式梯度洗脱选用pH值为7.6的Tris-NaCl缓冲液作为洗脱缓冲液，洗脱缓冲液中Tris浓度为0.05mol/L，洗脱缓冲液中NaCl浓度为2mol/L；步骤二阶梯式梯度洗脱分三次进行，第一次洗脱载样缓冲液与洗脱缓冲液的体积比为8:2，第二次洗脱载样缓冲液与洗脱缓冲液的体积比为6:4，第三次洗脱载样缓冲液与洗脱缓冲液的体积比为4:6；步骤三中上样样品为浓缩蛋白；步骤三中的上样缓冲液是含有NaCl、且pH值为7.0、浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液，上样缓冲液中NaCl的浓度为0.15mol/L。