| 摘要 |
1. Белок (ФА), обуславливающий свойство аутоагглютинации клеток чумного микроба, который расположен на поверхности клетки Y.pestis, и его наличие коррелирует со способностью бактерий к аутоагглютинативному росту в жидких питательных средах и с повышением гидрофобности клеток, характеризующийся:- молекулярной массой - 17,485 кДа,- белка - 80%,- нейтральных углеводов - 6%.2. Способ получения белка по п.1, включающий следующие стадии:а) в качестве штамма-продуцента используют Y.pestis КМ 1279 (депонирован в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб»), который получен из штамма Y.pestis EV76;б) Y.pestis КМ 1279 выращивают на 1,5% агаре LB (рН 7,2) при 26°C в течение 48 ч, бактерии смывают холодным забуференным физраствором (ЗФР) и высушивают ацетоном;в) бакмассу (1 г) отмывают от остатков питательной среды ЗФР и осаждают центрифугированием (8000 об/мин) на холоду (4°C) в течение 15 мин;г) клеточный осадок суспендируют в 200 мл раствора 5 мМ NaOH (рН 9,0), выдерживают, при встряхивании, при 26°C 2 ч и отделяют клетки центрифугированием (8000 об/мин) при 20°C в течение 15 мин, получают щелочной раствор, в котором содержится ФА, смытый с поверхности клеток;д) супернатант фильтруют через мембрану с диаметром пор 0,22 мкм;е) к фильтрату добавляют нейтрализованный раствор (рН 7,1) сульфата аммония до 25% насыщения, выдерживают 20 ч при 4°C до формирования осадка, последний отделяют центрифугированием при 10000 об/мин в течение 30 мин;ж) осадок освобождают от сульфата аммония, для этого его растворяют в 50 мл 5 мМ NaOH (рН 9,0) и диализуют против 5 мМ NaOH в объеме 2,5-3,0 л при 4°C в течение 24 ч, меняя раствор дважды;з) к диализованному раствору добавляют соляную кислоту до получения изоэлектрической то� |
