一种可高效清除环境污染物的转基因矮牵牛的培育方法

摘要

本发明提供了一种可高效清除环境污染物的转基因矮牵牛的培育方法，所述方法包括：将含有CYP2E1基因的载体pSLD50-6转入发根农杆菌K599，利用农杆菌转基因法获得转CYP2E1基因的转基因毛状不定根，毛状不定根在MS+BA 1.0mg/L的培养基上诱导出愈伤组织，愈伤组织在MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.4mg/L培养基上获得丛生芽，丛生芽在MS+NAA 0.1mg/L培养基上再生植株，获得转基因矮牵牛。本发明获得的矮牵牛可用于清除室内苯和甲苯等空气污染物，十分有利于人民的身心健康，有利于提高人民的生活品质，有利于生态环境建设。

主权项

一种可高效清除环境污染物的转基因矮牵牛的培育方法，所述方法包括：(1)将含有GenBank登记号为M15061的CYP2E1基因的质粒导入发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)，筛选得到抗性菌落；(2)抗性菌落经活化培养后，在含卡那霉素50mg/L+链霉素50mg/L的MS液体培养基中28℃下振荡培养至OD600为0.4～0.6，离心，收集的菌体细胞经清洗后进行浸染操作；将带有伤口的野生型矮牵牛(Petunia hybrida)的叶片预培养于含乙酰丁香酮20mg/L的MS液体培养基3d后，用收集的抗性菌落的菌体细胞侵染8min，再转入含乙酰丁香酮20mg/L的MS液体培养基共培养3d，经含头孢霉素500mg/L的MS液体培养基清洗后转入含苄氨基嘌呤1.0mg/L+卡那霉素50mg/L+头孢霉素500mg/L的MS液体培养基中，长出不定根后，将不定根转入含头孢霉素500mg/L+卡那霉素50mg/L的MS液体培养基中除菌和繁殖，获得转基因毛状不定根；(3)步骤(2)转基因毛状不定根在含苄氨基嘌呤1.0mg/L的MS培养基中培养获得愈伤组织，愈伤组织在含苄氨基嘌呤1.0mg/L+α‑萘乙酸0.4mg/L的培养基中培养获得丛生芽，丛生芽在含α‑萘乙酸0.1mg/L的培养基中培养获得转基因矮牵牛的再生植株。