一种检测发热伴血小板减少综合征病毒抗体IgM的ELISA试剂盒的制备和应用

摘要

本发明涉及一种检测发热伴血小板减少综合征病毒特异性抗体的ELISA试剂盒的制备和应用。试剂盒包含抗人IgM包被的ELISA反应板、HRP偶联的NP蛋白、TMB显色试剂。本发明公开采用反转录PCR方法扩增新布尼亚病毒JS-2007-001病毒株的核衣壳蛋白开放读框序列插入pQE30构建pQE30-NP表达质粒，用pQE30-NP转染M15菌株，并用IPTG诱导表达6His-NP重组蛋白，Hitrap纯化6His-NP重组蛋白，并标记为HRP偶联的NP(HRP-rNP)。反应板常规与待测样本孵育可结合样本中的抗新布尼亚病毒抗体(IgM)，后续检测使用HRP-rNP孵育，形成“抗人IgM-抗体-酶标抗原”的捕获法检测系统，加入酶底物TMB显色剂后产生的颜色反应，用酶标仪进行分析，根据显色程度得出新布尼亚病毒特异性的抗体(IgM)的含量。

主权项

一种用于检测新布尼亚病毒抗体IgM的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括：抗人IgM包被的反应板、HRP‑rNP蛋白、酶底物四甲基联苯胺显色剂；其中所述的rNP蛋白包被的反应板通过如下方法制备：采用SEQID No.1和SEQ ID No.2作为扩增引物，通过反转录PCR方法扩增保藏号为CCTCC V201211的新布尼亚病毒JS‑2007‑001的NP蛋白开放读框序列，随后将扩增后的序列插入pQE30构建pQE30‑NP表达质粒，随后用pQE30‑NP转染M15菌株，再采用常规IPTG诱导表达6His‑NP重组蛋白，Hitrap纯化6His‑NP重组蛋白，并包被于ELISA反应板。