基因重组人中性粒细胞弹性蛋白酶及其制备方法和该弹性蛋白酶的医药用途

摘要

本发明公开了一种基因重组人中性粒细胞弹性蛋白酶及其制备方法和该弹性蛋白酶的医药用途，属于基因工程领域。本发明利用人中性粒细胞裂解液，取含有基因组DNA的上清液，扩增获得中性粒细胞弹性蛋白酶的基因片段ELA2，连接克隆质粒转化大肠杆菌，构建弹性蛋白酶的PET-28a-ELA2表达质粒，在大肠杆菌中表达弹性蛋白酶，收集菌体，超声裂解菌液，镍柱洗脱后获得纯化的弹性蛋白酶。这样设计的本发明，利用弹性蛋白酶的表达基因，获得足量稳定的基因重组人中性粒细胞弹性蛋白酶，为临床检测和试验研究提供弹性蛋白酶原料，并为制备弹性蛋白酶高效抗体提供特异性抗原。

主权项

一种基因重组人中性粒细胞弹性蛋白酶的制备方法，其特征在于：人中性粒细胞的裂解液，取含有基因组DNA的上清液，用PCR方法扩增，获得中性粒细胞弹性蛋白酶的基因片段ELA2，构建克隆质粒后转化大肠杆菌TOP10的感受态细胞，提取质粒DNA，构建弹性蛋白酶的pET‑28a‑ELA2表达质粒，并在大肠杆菌中表达弹性蛋白酶，收集菌体，超声裂解菌液，镍柱洗脱纯化后获得弹性蛋白酶；所述PCR方法扩增的引物：Primer1:  5’‑ agctgcgcgg aggccacttc‑3’Primer2:  5’‑gga gccgt cacca aggctca‑3’。