主权项 |
一种从粗老茶中提取活性蛋白的方法,其特征在于:所述的从粗老茶中提取活性蛋白的方法包括按顺序进行的下列步骤:1)复合酶法预处理:将粗老茶加入到适量蒸馏水中至其全部浸没在蒸馏水中,用稀盐酸调节pH至4,然后加入占粗老茶总量0.5%~1.5%重量的由纤维素酶和果胶酶组成的复合酶,在40℃的温度下反应1~3小时,反应结束后在100℃的温度下灭活5min;2)超声碱法提取:在上述反应液中加入碱液,所述粗老绿茶与碱液的重量比为1∶20~1∶40,碱选自氢氧化钠或氢氧化钾中的一种,碱液浓度为0.1M~0.2M,然后在超声清洗仪中搅拌提取1~2小时,之后减压过滤,收集滤液而得到含有茶蛋白的茶叶供试液;3)等电点沉淀:向上述茶叶供试液中加入浓盐酸,以将溶液pH调至4.5,然后在4℃的温度下静置24~48小时;4)离心分离:利用离心分离机将上述沉淀液离心分离15~20分钟,收集沉淀物;5)冷冻干燥:将上述沉淀物重新溶解于蒸馏水中,然后置于‑18℃的温度下进行冷冻,冻实之后置于‑50℃的真空冷冻干燥机中进行干燥而得到茶蛋白样品;6)木瓜蛋白酶酶解:将上述冷冻干燥后的茶蛋白样品加入到pH为6~7的PBS缓冲溶液中,之后加入木瓜蛋白酶,其中木瓜蛋白酶的用量占茶蛋白样品重量0.5~1.5%,在55~65℃的温度下反应1~3小时,反应结束后在100℃的温度下灭活5min;7)等电点重新沉淀:向上述酶解后的反应液中加入浓盐酸,以将溶液pH调至4.5,然后在4℃的温度下静置24~48小时;8)离心或过滤分离:利用离心分离机将上述沉淀液离心分离15~20分 钟,收集沉淀物;9)冷冻干燥:将上述沉淀物重新溶解于蒸馏水中,然后置于‑18℃的温度下进行冷冻,冻实之后置于‑50℃的真空冷冻干燥机中进行干燥而得到所述的茶蛋白。 |