一种猪细小病毒LAMP快速检测引物、检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测猪细小病毒的检测试剂盒及检测方法。本发明含有10×Lamp buffer、Bst DNA聚合酶8U/μl、10mM dNTP、20-50μM内引物1、20-50μM内引物2、3-6μM外引物1、3-6μM外引物2、15-25μM LooP引物1、15-25μM LooP引物2和5M甜菜碱的反应液A和反应液B：1000×SYBR Green I。通过对照组织样品中DNA的提取、猪细小病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出猪细小病毒。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、仪器昂贵和操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，反应时间仅为43min，更加有利于推广和现场快速检测。

主权项

一种猪细小病毒LAMP检测试剂盒，包含提取DNA试剂和LAMP反应试剂两个组分，其特征在于所述的反应试剂包括以下成分：(1)根据权利要求1中所描述的一种猪细小病毒LAMP检测试剂盒的DNA提取试剂包括：浓度10％的SDS、浓度5mg/ml的蛋白酶K和浓度3M的NaAC。(2)根据权利要求1中所描述的一种猪细小病毒LAMP检测试剂盒的反应液含有10×Lamp buffer、Bst DNA聚合酶8U/μl、2.5 mM dNTP、20‑50μM内引物1、20‑50μM内引物2、3‑6μM外引物1、3‑6μM外引物2、15‑25μM LooP引物1、15‑25μM LooP引物2，甜菜碱(5M)，其中：10×Lamp buffer含有200mM、pH 8.8、25℃的Tris‑HCl，100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1％曲拉通X‑100；