苯妥因均相酶免疫检测试剂盒及其多克隆抗体的制备方法

摘要

本发明的目的是提供一种高度特异性的苯妥因多克隆抗体及苯妥因均相酶免疫检测试剂盒的制备方法，包括苯妥因特异性多克隆抗体的制备，葡萄糖六磷酸脱氢酶标记的苯妥因偶联物的制备，定标液的制备。本发明的苯妥因多克隆抗体特异性强，效价高，在药物交叉反应试验中，对测试的32种常见药物和化合物几乎无任何交叉反应，适合临床检验苯妥因的血药浓度。本发明的苯妥因药物浓度均相酶免疫检验试剂盒灵敏度高，能够准确检测10ng/mL的样本，苯妥因药物浓度的有效检测范围为20ng/mL-40μg/mL。本发明试剂盒的准确率高，回收率在90％以上，简便、快速、成本低、灵敏度高、可全自动化。

主权项

苯妥因特异性多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述方法为：步骤a：苯妥因衍生物的活化：将特异的苯妥因衍生物置于容器中，并依次加入纯二甲基酰胺、无水乙醇、10mM pH为5.0的磷酸钾缓冲液、1‑乙基‑3‑(‑3‑二甲氨丙基)碳二亚胺和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺，搅拌溶解，反应30分钟；步骤b：抗原的偶联和纯化：将牛血清白蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白溶解于10mL0.2M pH为8.5的磷酸缓冲液中得到溶液A，将步骤a活化的苯妥因衍生物滴加到所得的溶液A中，在2～8℃条件下搅拌12‑16小时，得到偶联的苯妥因抗原，将得到的偶联的苯妥因抗原进行透析纯化，得到苯妥因免疫抗原；步骤c：采用步骤b得到的苯妥因免疫抗原免疫动物，得到苯妥因特异性多克隆抗体。