| 主权项 |
一种植物叶绿素酶的纯化方法，其特征在于，具体操作步骤如下：(1)有机溶剂沉淀：植物蛋白粗提液，在4℃下边搅拌边缓慢加入有机溶剂，控制有机溶剂的体积比浓度为20‑40％；随后10000‑12000rpm离心沉淀，弃去上清液，向每1g沉淀中加入含有质量体积比浓度为0.24％TritonX‑100的20mmol/L、pH7.0的磷酸缓冲液10‑15mL，于4℃下缓慢搅拌1h，随后10000‑12000rpm离心，弃去沉淀，上清液即为酶液I；(2)离子交换层析：将步骤(1)得到的酶液I上样于离子交换层析柱，然后用含有0‑29.3g/L NaCl的20mmol/L、pH7.0磷酸缓冲液洗脱，收集具有叶绿素酶活性的组分，加入超滤浓缩离心管中，3000rpm，4℃离心，得到的浓缩液即为酶液II；(3)非变性凝胶电泳：将步骤(2)中得到的酶液II与含有20mmol/L、pH6.8的Tris‑HCl、质量体积比为10％的甘氨酸、质量体积比为0.1％的十二烷基磺酸钠的上样缓冲液混合，加样于丙烯酰胺质量浓度为5‑6％的浓缩胶及丙烯酰胺质量浓度为12‑14％的分离胶上，电泳；电泳后将分离胶每0.5cm横向割成条带，分别放入20mmol/L、pH7.0磷酸缓冲液中，37℃过夜浸出蛋白，收集有叶绿素酶活性的组分即为纯化的叶绿素酶。 |
