Nukleinsäureamplifikation auf Basis von Kügelchenemulsion

摘要

Verfahren zum Anreichern eines Amplikons, umfassend: (a) Verteilen einer Amplifikationslösung, die ein ausreichendes Gemisch von Reagentien, die zur Durchführung einer Amplifikationsreaktion der Templat-DNA erforderlich sind, eine Mehrzahl von Kügelchen und eine Mehrzahl von Arten von Templat-DNAs umfasst, in einer Mehrzahl von wässrigen Mikroemulsionströpfchen in einer wärmestabilen Ölphase, wobei ein erster Teilsatz der Tröpfchen ein Kügelchen und eine oder mehrere der Arten von Templat-DNAs darin eingekapselt umfasst, und ein zweiter Teilsatz der Tröpfchen ein Kügelchen ohne irgendeine der Arten von Templat-DNA darin eingekapselt umfasst, (b) Amplifizieren der Arten von Templat-DNAs innerhalb des ersten Teilsatzes von Tröpfchen, wobei das Kügelchen innerhalb des ersten Teilsatzes von wässrigen Tröpfchen ein daran immobilisiertes Amplikon aufweist, (c) Aufbrechen der wässrigen Emulsionströpfchen zum Freisetzen der Kügelchen des ersten und des zweiten Teilsatzes, (d) Hybridisieren eines biotinylierten Primers an das Kügelchen-immobilisierte Amplikon, der zu dem 3'-Ende des Amplikons komplementär ist und in Schritt (e)...