一种含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法

摘要

本发明提供了一种含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，该方法首先培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞，然后从培养液中提取滑膜细胞分泌的高分子透明质酸，并将提取了高分子透明质酸后的培养液经过超滤后浓缩得沉集物，最后将提取的高分子透明质酸与所得沉集物按药用量溶解于生理盐水中即制得含有高分子透明质酸的生物滑液。本发明由于原料的来源与细胞的培养均为生理状态下，故制备的人工滑液的生物学活性、物理性状、流变学性能均与天然滑液极为接近。

主权项

一种含有高分子透明质酸的生物滑液的制备方法，其特征在于：首先培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞，然后从培养上清液中提取滑膜细胞分泌的高分子透明质酸，并将提取了高分子透明质酸后的培养上清液经过超滤后浓缩得沉积物，将提取的高分子透明质酸与所得沉积物按药用量溶解于生理盐水中即制得含有高分子透明质酸的生物滑液，具体步骤为：（1）培养动物或人的能够产生透明质酸的滑膜细胞：取需要量的滑膜组织，用组织块法培养滑膜细胞，然后用单细胞克隆法对滑膜细胞进行分型，得单细胞群体悬液；（2）微载体培养：将单细胞群体悬液接种入装有微载体的容器中培养；（3）滑膜细胞微载体培养上清液中透明质酸的提取：将TGF‑β、TNF‑α、EGF、rhEGF或者HGF加入培养上清液，刺激后换液，留取培养上清液，并对培养上清液进行离心，收集离心后的培养上清液，取需要量的培养上清液，经高效液相色谱提取分子量大于100万的高分子透明质酸；（4）对提取了高分子透明质酸后的滑膜细胞微载体培养上清液的处理：对提取后的培养上清液进行充分离心、沉集处理，收集沉积物，然后将收集的沉积物超滤浓缩；（5）按药用量将提取的高分子透明质酸和超滤浓缩的沉积物溶解于生理盐水中，低温保存，制得含有高分子透明质酸的生物滑液。