一种检测烟草烟碱转化相对水平的方法

摘要

本发明公开了一种检测烟草烟碱转化相对水平的方法，包括：(1)收集同一品种烟草不同时期或不同部位或不同品种烟草的叶片；(2)分别提取所述叶片的总RNA，逆转录合成cDNA；(3)针对烟碱转化相关基因设计特异性引物，以所述cDNA为模板，利用所述特异性引物进行实时荧光定量PCR，得到各自的Ct值；(4)根据所述Ct值，利用标准曲线计算得到各cDNA中烟碱转化相关基因的模板量，判断同一品种烟草不同时期或不同部位或不同品种烟草的叶片之间的烟碱转化相对水平。本发明公开的方法不仅能对烟草烟碱转化相对水平进行实时监控，且准确度高，灵敏性强，能及时将不良烟草转化株淘汰。

主权项

一种检测烟草烟碱转化相对水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)收集同一品种烟草不同时期或不同部位或不同品种烟草的叶片；(2)分别提取所述叶片的总RNA，逆转录合成cDNA；(3)针对烟碱转化相关基因设计特异性引物，以所述cDNA为模板，利用所述特异性引物进行实时荧光定量PCR，得到各自的Ct值；(4)根据所述Ct值，利用标准曲线计算得到各cDNA中烟碱转化相关基因的模板量，判断同一品种烟草不同时期或不同部位或不同品种烟草的叶片之间的烟碱转化相对水平；所述特异性引物为：上游引物：5’‑ACGTGATCCTAAACTCTGGTCTG‑3’；下游引物：5’‑GCCTGCACCTTCCTTCATG‑3’；所述烟碱转化相关基因为烟碱去甲基化酶基因CYP82E4，其全长cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。