肝素酶I的固定化方法

摘要

本发明涉及一种肝素酶I的固定化方法，尤其涉及一种以壳聚糖微球为固定化材料，对肝素酶I进行固定化的方法。肝素酶I固定化以后具有可回收，可重复利用，酶与底物和产物易分离，稳定性增强等优越性。

主权项

一种肝素酶I的固定化方法，包括下述步骤：（1）肝素酶I溶液的制备：选择Tris‑HCl缓冲液（pH7.0,含CaCl2）作为肝素酶I的溶剂，将肝素酶I溶解在该缓冲液中，制得肝素酶I溶液；（2）肝素酶I与壳聚糖微球的交联：将壳聚糖微球用Tris‑HCl缓冲液（pH 7.0, 含10mM CaCl2）充分溶胀，再取步骤（1）获得的肝素酶I溶液 ，将其加入该壳聚糖微球中，进行交联；（3）用乙酸‑乙酸钠（pH 6.5‑8.0,含NaCl）和Tris‑HCl（pH 6.5‑8.0,含CaCl2和NaCl）两种缓冲液分别洗涤上述交联后的壳聚糖微球，至洗脱液无酶活性；（4）利用还原剂处理步骤（3）中获得的固定了肝素酶I的壳聚糖，随后，如果需要，除去残余的还原剂，由此得到固定在壳聚糖微球上的肝素酶I。