一种基因工程囊素样肽及其表达基因与应用

摘要

本发明涉及一种基因工程囊素样肽及其表达基因与应用，属于基因工程技术领域。一种基因工程囊素样肽，具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，它由具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的基因片段编码。本发明所保护的基因工程囊素样肽的基因片段，可以准确、高效的复制表达，该基因插入表达载体pET-32a转化入大肠杆菌BL21(DE3)后，经高效表达，BS(囊素三肽)含量含量可占菌体总蛋白的28.6％，完全达到工业化生产的要求。

主权项

一种基因工程囊素样肽的基因片段在制备囊素三肽中的应用，其特征在于，步骤如下：(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的基因工程囊素样肽的基因片段插入表达质粒，得到重组质粒；(2)将步骤(1)制得的重组质粒转化宿主菌，构建宿主菌表达体系；(3)利用步骤(2)构建的宿主菌表达体系诱导表达囊素样肽，并经过后处理工艺制得囊素三肽；所述步骤(2)中所述宿主菌为：大肠杆菌BL21(DE3)；所述步骤(3)中后处理工艺的步骤如下：将表达后的囊素样肽菌液经离心后，收集菌体沉淀，用0℃冰冷的高渗透溶液悬浮菌体沉淀，混合均匀，冰浴8～10min；然后，离心收集菌体沉淀，用等体积0℃冰冷的低渗透溶液悬浮菌体沉淀，混合均匀，冰浴8～10min；然后，离心取上清液，过0.2～0.24um混合纤维素膜，得到囊素三肽；上述高渗透溶液：pH＝8.5，终浓度Tris‑HCl 20～30mmol/L、EDTA 2～3mmol/L、蔗糖25wt％；所述的低渗透溶液为：pH＝8.5，终浓度Tris‑HCl 20～30mmol/L、EDTA 2～3mmol/L。