一种通过转DdICE1基因提高切花菊抗逆性的方法

摘要

本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转DdICE1基因提高菊花抗逆性的方法，包括以下步骤：构建DdICE1基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养初步获得抗性植株。对转化植株进行PCR、半定量及定量RT-PCR检测证实外源基因已经转入转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行抗性检测，发现与未转基因植株相比，转基因植株抗寒、抗旱和抗盐性有很大提高。本发明通过转化外源DdICE1转录因子并正常转录表达，及在逆境下诱导下游一系列抗逆基因的表达从而提高切花菊的抗逆性，为利用基因工程技术选育菊花抗逆品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。

主权项

一种通过转DdICE1基因提高菊花抗逆性的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）构建DdICE1基因植物表达载体：以菊属异色菊cDNA为模板，设计引物进行PCR反应，在目的基因DdICE1的上游和下游分别引入Sal I和Not I酶切位点，上游引物DdICE1‑gateway‑F，所述上游引物的序列为SEQ ID NO.2；下游引物DdICE1‑gateway‑R， 所述下游引物的序列为SEQ ID NO.3，PCR产物连接到pMD19‑T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒，将提取的阳性质粒由SalⅠ和NotⅠ双酶切得到的DdICE1片段与Sal I和Not I双酶切的pENTR1A连接，转化，提取的阳性质粒经NsiⅠ单酶切线性化后与pEarleyGate103载体质粒进行LR重组反应，得到DdICE1基因植物表达载体pEarleyGate103‑DdICE1，所述的DdICE1基因的序列为SEQ ID NO.1；（2）采用农杆菌介导法将步骤（1）构建的DdICE1基因植物表达载体转入菊花中，进行培养初步获得抗性植株；所述的抗逆性为抗寒性、抗盐性和抗旱性。