一种用海藻酸钠-壳聚糖固定磷脂酶A₂的方法

摘要

本发明提供一种以海藻酸钠-壳聚糖复合载体为材料，采用物理包埋的方法来固定磷脂酶A2。研究了海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度、钙离子浓度、戊二醛浓度和交联时间等不同固定化条件对磷脂酶A2固定效率和催化效果的影响，并采用响应面的分析方法对所研究的因素进行优化。通过固定磷脂酶A2的SEM图像进一步解释利用海藻酸钠-壳聚糖作为载体固定磷脂酶A2的优势。根据本发明中复合载体的包埋特性固定磷脂酶A2，提高了酶在反应体系中的活性和稳定性，调节和控制酶的活性与选择性，从而有利于酶的回收和产品的生产，最终得到的固定化酶活力回收率为74.8％，对于油脂精炼中的酶法脱胶工艺具有重要指导意义。

主权项

一种用海藻酸钠‑壳聚糖固定磷脂酶A2的方法，其特征在于用海藻酸钠‑壳聚糖复合载体固定磷脂酶A2通过以下步骤实现：步骤一：在40℃水浴中分别保温溶解浓度为0.5％～3.0％的海藻酸钠，同时称取一定量的壳聚糖在5％的醋酸溶液于40℃水浴中保温溶解，再向完全溶解的壳聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaCl2溶液，充分混匀。用移液枪准确移取1ml稀释10倍的酶液于一定浓度的10mL海藻酸钠溶液中，搅拌均匀。静止一段时间后，用灭菌后的10mL注射器吸入上述混合液，以约5滴/s注入一定浓度的10mL壳聚糖醋酸溶液、CaCl2混合溶液中，以转速180r/min搅拌，形成光滑的微胶囊球，再加入一定浓度戊二醛，同时快速搅拌，将其置于4℃环境固定化一定时间。将微胶囊以pH8.0NaHCO3、0.1mol/L NaCl、0.1mol/L pH5.5NaAc、pH8.0Tris‑HCl顺序洗涤后，然后进行冷冻干燥，制得的固定化酶进行酶活力测定分析，确定海藻酸钠浓度；步骤二：选择壳聚糖浓度分别为1.0％～3.5％，过程同步骤一，确定壳聚糖浓度；步骤三：选择氯化钙浓度分别为0.1mol/L～0.35mol/L，过程同步骤一，确定氯化钙浓度；步骤四：选择戊二醛浓度分别为0.2％～0.45％，过程同步骤一，确定戊二醛浓度；步骤五：选择交联时间分别为3.5h～8.5h，过程同步骤一，确定交联时间。