用于通过转座酶的DNA片段化和标记的方法和组合物

摘要

本发明涉及用于通过转座酶的DNA片段化和标记的方法和组合物。本发明提供了转座酶-介导的使DNA靶标片段化和标记的新组合物。本发明涉及在转座酶反应中使用锰离子(Mn2+)来改进转座酶反应的令人吃惊的发现。本发明还涉及Mg2+离子可以比先前预想的高很多的水平用于具有野生型和/或工程改造的转座酶的转座酶反应中的令人吃惊的发现。本发明提供了在体外反应中使用天然存在的转座酶，以及用于切割、标记和扩增靶标DNA的改进的方案。

主权项

用于靶标DNA分子的DNA片段化的体外方法，所述方法包括：使：包含至少一个双链部分的第一DNA分子，其中所述双链部分包含转座酶的识别序列并且该DNA分子还包含不包含该转座酶的识别序列的部分；包含至少一个双链部分的第二DNA分，其中双链部分包含上述转座酶的识别序列并且该DNA分子还包含不包含该转座酶识别序列的部分，其中所述序列的非识别部分不同于第一DNA分子的非识别部分；和上述转座酶组合；其中上述三种物质的组合允许它们相互作用；以及使这些相互作用的物质与靶标DNA分子和Mg+2离子、Mn+2离子、或Mg+2离子与Mn+2离子两者在使得相互作用的物质与靶标DNA缔合并通过转座酶‑介导的切割来切割靶标DNA分子的条件下组合，以提供切割的DNA产物。