一种快速检测KRAS基因突变的方法

摘要

本发明提出一种快速检测KRAS基因突变的方法，以克服传统探针熔解曲线法灵敏度低，检测不精确的缺点。该快速检测KRAS基因突变的方法，包括以下步骤：（1）分子信标探针和模板扩增引物的设计及合成；（2）提取被测样本的KRAS基因组DNA；（3）配制反应体系；（4）PCR反应；PCR反应完成后进行熔解曲线分析，通过熔解峰的Tm值判断出被测样本中是否发生了KRAS突变。本发明将分子信标探针和延伸阻滞引物结合起来，并利用无5’→3’外切酶活性聚合酶进行体外快速检测KRAS突变，不仅节省了耗材，同时具有高灵敏度，高特异性的特点，使检测结果更可靠。

主权项

1.一种快速检测KRAS基因突变的方法，包括以下步骤：（1）分子信标探针和模板扩增引物的设计及合成上游引物(25nt):5’-GATAGTGTATTAACCTTATGTGTGA-3’延伸阻滞引物(38nt):5’-分子信标探针(27nt):（2）提取被测样本的KRAS基因组DNA；（3）配制反应体系在反应管中加入被测样本的KRAS基因组DNA、上游引物、延伸阻滞引物、UNG酶(尿嘧啶-N-糖基化酶)、5’→3’外切酶活性缺失聚合酶(TIANNIUMW^TMTaq DNA Polymerase)，dNTPs(脱氧核糖核苷三磷酸)、dUTP(脱氧尿苷三磷酸)、分子信标探针、10×PCR Buffer(TIANNIUM^TMTaq PCR Buffer)；（4）PCR反应将配制好的反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增和熔解，PCR反应完成后进行熔解曲线分析，通过熔解峰的Tm值判断出被测样本中是否发生了KRAS突变。