一种安全快速提取茶树老叶片基因组DNA的方法

摘要

本发明公开了一种安全快速提取茶树老叶片基因组DNA的方法，包括以下步骤：将茶树叶片于液氮研磨至粉末状，再加入800μL预热DNA提取缓冲液，摇匀后于65℃水浴30min；加入125μL 5mol/LKAC，摇匀后冰浴20min；待反应充分后，离心3min，将上清液加入吸附柱中并装入收集管，离心1min；将上述收集管中滤液再次加入吸附柱中并装入收集管，离心1min，弃废液；向吸附柱加入800μL的70％乙醇，离心1min，弃废液；再次加入800μL的70％乙醇，离心1min，弃废液；重新将吸附柱装入收集管中，离心3min，除去剩余乙醇；取出吸附柱，于50℃放置5min；将吸附柱放入新离心管中，加入60μL TE，于40℃放置5min，离心3min；离心管中液体为提取的茶树基因组DNA。安全、快速提取茶树叶片基因组DNA。

主权项

一种安全快速提取茶树老叶片基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将茶树叶片于液氮研磨至粉末状，再加入800μL预热DNA提取缓冲液，摇匀后于65℃水浴30min；所述DNA提取缓冲液由1.5％(w/v)SDS(pH 5.5)，100mmol/L Tris‑HCl(pH8.0)，40mmol/L EDTA(pH8.0)，1mol/L NaCl，2.5％PVP，10mmol/L β‑巯基乙醇组成；所述茶树叶片为新鲜的茶树老叶片；(2)加入125μL 5mol/LKAC，摇匀后冰浴20min；(3)待反应充分后，1.2×104r/min离心3min，将上清液加入吸附柱中并装入收集管，1.2×104r/min离心1min；(4)将上述收集管中滤液再次加入吸附柱中并装入收集管，1.2×104r/min离心1min，弃废液；(5)向吸附柱加入800μL的70％乙醇，1.2×104r/min离心1min，弃废液；(6)再次加入800μL的70％乙醇，1.2×104r/min离心1min，弃废液；(7)重新将吸附柱装入收集管中，1.2×104r/min离心3min，除去剩余乙醇；(8)取出吸附柱，于50℃放置5min；(9)将吸附柱放入新离心管中，加入60μL TE，于40℃放置5min，1.2×104r/min离心3min；离心管中液体为提取的茶树基因组DNA。