黑素细胞生物活性检测及个体化培养方法

摘要

本发明提供了一种黑素细胞生物活性检测方法及个体化培养方法。本发明采用HU16选择性培养基在体外成功培养了白癜风患者的移植所需足量的黑素细胞，建立了黑素细胞细胞分裂时间(DOT)、黑素含量(M)和黑素制造量(MP)的检测方法；同时建立了黑素细胞个体化培养实验方案，效果明显。本发明为自体黑素细胞移植治疗白癜风筛选生物学活性好的黑素细胞提供了实用可靠的实验依据，并对生长不好黑素细胞进行个体化矫正后再进行细胞移植提供了较好的实验方案。

主权项

黑素细胞生物活性检测方法，所述方法包括：取分离自白癜风患者表皮细胞的黑素细胞，进行传代培养，传代培养过程中进行下述参数评测：(1)黑素细胞分裂时间DOT计算：每次接种和传代时计数黑素细胞数量，计算获得传代时细胞生长倍数P，根据细胞生长倍数P和生长时间T，按公式计算细胞黑素分裂时间DOT＝0.3T/logP，单位为日；(2)黑素含量M计算：用二甲基亚砜溶解已知浓度的黑色素，在分光度计475nm处测吸光度A0，以黑色素含量为横坐标、以对应吸光度值为纵坐标制作标准曲线；在黑素细胞接种和传代时，收集定量黑素细胞离心，加入1mol/1NaOH在37℃水浴溶解细胞30分钟后，在分光度计475nm处测细胞吸光度A，根据标准曲线计算获得每个细胞的黑素含量M，单位ng/cell；(3)黑素制造量MP计算：MP＝(M2×P‑M1)/1.3D(P‑1)，其中：MP为黑素细胞制造量，单位ng/cell/24hr；M1为接种时细胞黑素含量，单位ng/cell；M2为传代时细胞黑素含量，单位ng/cell；P为细胞增长倍数；D为细胞分裂时间DOT，单位日；(4)结果判断：若传代细胞的DOT值＜4.5，且M、MP满足：0.15＜M＜0.30，MP＜0.10，则判定该传代细胞处于开始或生长阶段，适宜进行自体黑素细胞移植。