一种恒温快速检测甲型H1N1流感病毒核酸的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测病毒核酸的方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明是一种快速、等温的甲型H1N1流感病毒RNA扩增方法，整个反应有赖于AMV逆转录酶、T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNase H)共同协作而完成，不需特殊仪器，不需温度循环，扩增效率大于等于PCR，其反应产物是单链RNA。本发明的有益效果是：具有与RT-PCR检测方法相同或更高的敏感性；重要的是由于扩增产物为RNA，避免了RT-PCR扩增产物的污染问题；整个反应在一小时内完成；操作简单方便；反应可实时监控，也可采取终点法检测，可作为目前甲型H1N1流感病毒检测的重要工具。

主权项

一种恒温快速检测甲型H1N1流感病毒核酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内含有按以下步骤制备的物质：a.制备特异性检测引物，对现有核酸数据库中的所有甲型H1N1流感血凝素基因核酸序列进行同源性对比，根据保守序列设计引物，在反向引物的5’端加入T7启动子序列，得到特异性检测引物：5’‑ATTCACCATCCATCTACTAG‑3’5’‑AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGTCCAGTAATAGTTCATTCTC‑3’；b.设计特异性检测探针，在上述特异性检测引物的内部设计分子信标探针，所述分子信标探针的5’端用5(6)‑羧基荧光素(FAM)进行荧光标记，3’端用淬灭荧光4‑(4’‑恶烷氨基苯偶氮)苯甲酸(DABCYL)进行荧光标记，得到特异性检测探针：FAM‑CGCGATACAGCAAGAAGTTCAAGCCKGAATCGCG‑DABCYL；c.制备扩增反应液；d.酶混合物，所述酶混合物含有4‑12U的AMV逆转录酶、20‑60U的T7RNA多聚酶和0.05‑0.2U的核酸酶H。