一种制备猪去氧胆酸的工艺

摘要

本发明公开了一种制备猪去氧胆酸的工艺，属于生物制药领域。该提取纯化工艺包括下脚料盐析、碱液水解、溶解脱色、过滤脱水、浓缩结晶、真空干燥得粗品、甲酯化、柱层析分离、再次碱液水解、纯化、成品真空干燥等。本发明的优点是所得到的产品纯度高、无异味、环境友好、溶剂可回收再利用，且易于操作，成本低，操作简单、安全，可用于工业化生产。

主权项

一种制备猪去氧胆酸的工艺，其具体步骤如下：（1）盐析：将提取胆红素的下脚料作为原料，加入反应釜中，再向反应釜中加水，用酸溶液调节pH至2.0～4.0，温度控制在15～25℃之间，边搅拌边加入盐，连续搅拌，抽滤，得滤饼；（2）碱液水解：将步骤（1）中的滤饼加入反应釜中，再加入碱液进行水解，水解时间为30～60min，以酸溶液酸化至刚果红变蓝，静置，抽滤，得到滤饼；（3）吸附脱色：将步骤（2）中得到的滤饼加入反应釜中，再向反应釜中加入有机溶剂和活性炭，加热至65～80℃，冷凝回流30～60min；冷却至20～30℃，抽滤，得滤液，向滤液中加入脱水剂，脱水15～24h；抽滤，滤液旋蒸，浓缩至原体积的1/3～2/3，静置结晶，过滤收集晶体，真空干燥，得到猪去氧胆酸粗品；（4）甲酯化：取猪去氧胆酸粗品溶于有机溶剂中，加入浓硫酸进行酯化，于15～25℃下搅拌36～48h，调节pH至6.8～7.2，继续搅拌1～2h；进行抽滤，滤饼用有机溶剂洗涤2～3次，合并滤液及洗液，减压蒸去有机溶剂，得到棕色粘稠状物；并经过TLC监测；（5）柱层析：湿法装柱；将步骤（4）中所得棕色粘稠状物加入硅胶柱中；用洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，经过TLC监测；再进行减压浓缩，得到淡黄色粘稠状固体；（6）水解：将步骤（5）所得淡黄色粘稠状固体加入反应釜中，加入碱和水，用酸溶液调节pH至刚果红变蓝，抽滤，收集沉淀，水洗至流出液无色，得猪去氧胆酸；（7）纯化：将步骤（6）所得猪去氧胆酸加入有机溶剂中，在机械搅拌条件下加热至有机溶剂水溶液完全沸腾，待猪去氧胆酸溶解后，分次加入水，继续搅拌，待温度降至10～20℃，再机械搅拌30～60min，进行抽滤，得到猪去氧胆酸晶体；（8）真空干燥：将步骤（7）中的晶体用恒温真空度干燥箱进行干燥，即得猪去氧胆酸纯品。