一种针对疾病个体化用药的基因分型快速试纸条检测方法

摘要

本发明公开了一种针对疾病个体化用药的基因分型快速试纸条检测方法。该快速分型检测方法包括以下几个重要的环节：基于AS-PCR的方法，对CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2C19*17等位基因位点进行识别与扩增。利用扩增片段标记的生物素和纳米金磁微粒表面链亲和素相互作用，结合侧向流技术，实现基因分型快速检测。利用金磁微粒作为杂交载体，无需对目的片段进行纯化、浓缩而导致的高成本、费时、费力的问题。

主权项

一种针对疾病个体化用药的基因分型快速试纸条检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)针对待检测样本基因组DNA的CYP2C19*2（681G>A）、CYP2C19*3（636G>A）、CYP2C19*17（‑806C>T）这三个SNP位点，对每一个SNP位点均设计一条野生型特异性引物、一条突变型特异性引物和一条共用引物进行识别与扩增；在野生型特异性引物和突变型特异性引物的5′端均标记地高辛，共用引物的5′端标记生物素；(2)针对一个SNP位点，平行做两管PCR反应，其中一管加入共用引物与等量的突变型特异性引物，另一管中加入共用引物与等量的野生型特异性引物，两管的PCR反应条件相同并同时置于PCR仪中反应；这样，对于（1）步骤中所述的三个SNP位点，共做六管PCR反应；Taq聚合酶的特异性决定了PCR反应能否顺利进行；(3)利用链亲和素金磁微粒特有的可目视化特性，采用层析技术并以生物素和链亲和素作用，对步骤(2)得到的扩增产物中SNP基因型完成分型检测；其中，层析技术采用的试纸条满足：a、试剂条的免疫层析膜上的质控线处包被有质控用生物素；b、检测线处包被有捕获用抗地高辛抗体；c、结合垫上喷涂有链亲和素金磁微粒；经步骤(2)取出的两管PCR产物分别滴至两支试纸条的样品垫上进行检测，质控线显色表明此次实验有效，即步骤(2)的该管PCR反应顺利，即得到的产物一端标记有生物素，另一端标记有地高辛，滴加至上样垫，一端的生 物素与链亲和素磁粒特异性结合之后，通过层析作用上移至检测线处，另一端上的地高辛与检测线上的抗地高辛抗体特异性结合显色，由此判断出其基因型：滴加含有野生型特异性引物的PCR产物在试纸条的检测线上显色，而含有突变型特异性引物的PCR产物在试纸条的检测线上不显色，则表明基因型为野生型；反之基因型为突变型；若两支试纸条的检测线均显色，则表明基因型为杂合型。