检测T细胞微小RNA150相对含量反映个体免疫状态的技术

摘要

本发明公开了可用于对微小RNA150核苷酸片段进行相对定量检测的一条茎环引物和多条配套扩增的引物、试剂盒和评价表。试剂盒包括试剂A：5μM逆转录miR-150、U6的茎环引物混合液50μL；试剂B：20U/μL M-MuLV逆转录酶，50μL；试剂C：5×逆转录缓冲液，200μL含dNTP浓度为5mM(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)，Tris-HCl浓度为250mM，KCl浓度为250mM，MgCl2浓度为20mM，50nM DTT。试剂D：2μM通用引物100μL；试剂E：2μM miR-150特异性引物100μL；试剂F：2μM U6特异性引物100μL；试剂G：5U/μL Taq DNA聚合酶，20μL；试剂H：2×PCR缓冲液组成，包含600nM ROX，1×SYBR Green I dye，2mM dNTPs(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、80mM Tris-HCl、80mM KCl、40mM(NH4)2SO4、6mM MgSO4。本发明所提供的整套试剂盒可对不同类型T细胞的微小RNA150核苷酸片段进行相对定量分析，并对个体免疫状态进行评估。

主权项

1.用于微小RNA 150相对定量的一套试剂盒，其特征在于，由下述试剂组成：试剂A：5μM逆转录miR-150引物和逆转录U6的茎环引物混合液50μL，其中逆转录miR-150引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，逆转录U6的茎环引物的核酸序列如SEQ ID NO.4所示；试剂B：20U/μLM-MuLV逆转录酶50μL；试剂C：5×逆转录缓冲液200μL，其含包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP的浓度为5mM的dNTP，浓度为250mM的Tris-HCl，浓度为250mM的KCl，浓度为20mM的MgCl₂和50nM DTT；试剂D：2μM通用引物100μL，其中通用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；试剂E：2μM miR-150特异性引物100μL，其中miR-150特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；试剂F：2μMU6特异性引物100μL，其中U6特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；试剂G：5U/μL Taq DNA聚合酶20μL；和试剂H：2×PCR缓冲液，其包含600nM ROX，Green I dye，包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP的2mM dNTPs、80mM Tris-HCl、80mM KCl、40mM(NH₄)₂SO₄和6mM MgSO₄。