一种快速的基因表达载体构建连接方法

摘要

本发明涉及生物基因克隆表达技术，具体是一种快速的基因表达载体构建连接方法，弥补了现有的基因表达载体构建方法存在的缺陷，其步骤为（1）酶切基因：酶切体系Ⅰ：含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化，酶切体系Ⅱ：转基因载体经限制性内切酶消化；（2）回收获得目的基因片段及酶切载体；（3）酶切产物的连接；（4）连接产物的转化；（5）转化产物的鉴定。本发明所述的快速的基因表达载体构建连接方法简单方便、实用性强，替换了凝胶电泳、EB染色等步骤，提高了科研人员的安全性，提高了工作效率，减少了试验环节所需费用，并能够有效地减少试验用EB对水资源等环境的污染。

主权项

一种快速的基因表达载体构建连接方法，其步骤为（1）酶切基因：酶切体系Ⅰ：含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化，酶切体系Ⅱ：转基因载体经限制性内切酶消化；（2）回收获得目的基因片段及酶切载体；（3）酶切产物的连接；（4）连接产物的转化；（5）转化产物的鉴定；其特征在于，所述的步骤（2）回收获得目的基因片段及酶切载体的步骤为：步骤（1）的酶切体系Ⅰ、Ⅱ中分别加入体积为酶切体系Ⅰ、Ⅱ3～5倍的无水乙醇，均在‑20～‑80℃环境下放置0.5～1h，随后12000～13000rpm离心沉淀5～10min，弃上清，真空干燥，加入20µl‑30µl的pH8.0的TE缓冲液重新溶解，分别电泳检测目的基因片段及酶切载体浓度。