脂环酸芽孢杆菌的间接ELISA检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种脂环酸芽孢杆菌的间接ELISA检测试剂盒，包括（1）-（10）的组分。同时，本发明还公开了脂环酸芽孢杆菌的间接ELISA检测试剂盒的使用方法。本发明提出的脂环酸芽孢杆菌的间接ELISA检测试剂盒填补了国内没有建立针对脂环酸芽孢杆菌的ELISA检测方法的空白，且具有较高的灵敏度和特异性。

主权项

脂环酸芽孢杆菌的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：（1）包被液：将1.59g Na2CO3和2.93g NaHCO3加水充分溶解后，将pH调到9.6后，加去离子水定容为1L；（2）PBS缓冲液：将准确称量8g NaCl、0.2g KCl、1.42g Na2HPO4和0.27g KH2PO4充分溶液在800mL去离子水中，然后滴加HCl将pH值调节到7.4，然后加去离子水定容至1L；（3）PBST洗涤液：向1L PBS缓冲液中加入500μL Tween‑20；（4）检测抗体稀释液：取10mL 37℃过夜培养的大肠杆菌菌液，12000rpm离心3min收集菌体，用PBS洗涤两次后，加入3mL PBS重悬菌体，超声破碎30min，超声5s、间隔5s；将超声破碎后的液体在4℃，12000rpm离心30min，收集的上清为大肠杆菌裂解，即检测抗体稀释液；（5）封闭液：1%牛血清白蛋白BSA；（6）终止液：由10.87mL的浓硫酸与89.13mL的去离子水混合配制成的2M H2SO4；（7）包被抗原：菌体蛋白，浓度为20μg/mL；（8）检测抗体：脂环酸芽孢杆菌的兔抗血清，即脂环酸芽孢杆菌多克隆抗体，采用检测抗体稀释液稀释，稀释度为1:320；（9）酶标二抗：辣根过氧化物酶HRP标记山羊抗兔IgG，采用PBS稀释，稀释度为1：10000；（10）显色液：TMB显色液。