一种从鸡血中分离免疫球蛋白IgY的方法

摘要

本发明公开了一种从鸡血中分离免疫球蛋白IgY的方法。具体步骤如下：1)血浆预处理，取新鲜鸡血，离心，除去红细胞，得到血浆。2)辛酸沉淀，向血浆中加入辛酸达到一定浓度，沉淀去除杂蛋白，离心分离，取上清液。3)柱层析，用填充有混合模式吸附剂的层析柱分离上清液，收集洗脱峰。4)脱盐和干燥，将收集液脱盐，冷冻干燥，得到高纯度的免疫球蛋白IgY。本发明的特色在于开发了一条新的分离工艺，可以从鸡血中分离得到高纯度的免疫球蛋白IgY。方法的关键在于从辛酸沉淀的上清液中直接提取免疫球蛋白IgY，具有操作步骤简单、分离效率高、成本低廉的特点。

主权项

一种从鸡血中分离免疫球蛋白IgY的方法，其特征在于包括如下步骤：1)配制0.1M的柠檬酸钠溶液作为抗凝剂，将鸡血与抗凝剂按照体积比为9∶1的比例混合均匀，用离心机以2500～3000rpm转速离心10～20分钟，得到血浆；2)将血浆与pH为4.5～5.0，浓度为60mM的乙酸‑乙酸钠缓冲液按照体积比为1～4混合均匀，得到稀释血浆，加入辛酸，辛酸加入量为30～60μl/ml稀释血浆，4～8℃静置1～4小时，用离心机以8000～10000rpm转速离心20～30分钟，取上清液，得到免疫球蛋白IgY粗品溶液；3)调节免疫球蛋白IgY粗品溶液的pH至7.0～8.5，用0.45μm滤膜过滤后，上样到填充有混合模式吸附剂的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰对应的洗脱缓冲液，得到免疫球蛋白IgY溶液；4)将免疫球蛋白IgY溶液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于90％的免疫球蛋白IgY产品；所述的混合模式吸附剂为以巯基甲基咪唑为配基的层析介质、以巯基苯并咪唑为配基的层析介质或者商业化介质MEP HyperCel；所述的平衡缓冲液为Tris‑HCl缓冲液，pH值为7.0～8.5；所述的洗脱缓冲液为乙酸‑乙酸钠缓冲液，pH值为3.6～4.2。