一种增加测序读长的测序方法

摘要

本发明涉及生物基因工程领域，提供了一种增加测序读长的测序方法。本发明所述增加测序读长的测序方法，首先将第一锚定引物结合于待测核酸片段的第一接头上，使用连接测序法读取第一锚定引物延伸末端后的M个核苷酸的序列信息；利用内切酶识别相应的酶切识别位点将已读取序列信息的核苷酸部分或完全切除，在酶切回收的待测序片段上连接新的第二接头，然后在第二接头上锚定结合第二锚定引物，并在第二锚定引物延伸末端连接新的荧光探针，向前延伸读取核苷酸序列信息；通过循环上述操作，得到待测核酸片段所需的核苷酸序列信息，从而利用酶切延伸测序的方法增加了测序读长。

主权项

一种增加测序读长的测序方法，其特征在于，包括以下步骤：A.将第一锚定引物结合于待测核酸片段上的第一接头上；B.在第一锚定引物延伸末端分别连接带不同位置标记的荧光探针，并检测相应连接产物的荧光信号，得到第一锚定引物延伸末端后M个核苷酸的序列信息；C.利用内切酶将步骤B中已得到序列信息的核苷酸部分或完全切除，得到带有含有待测序片段的酶切产物；D.酶切产物连接第二接头得到新待测核酸片段，将第二锚定引物结合于新待测核酸片段的第二接头上；E.在第二锚定引物延伸末端分别连接带不同位置标记的荧光探针，并检测相应连接产物的荧光信号，得到第二锚定引物延伸末端后N个核苷酸的序列信息；F.更换内切酶、接头、锚定引物和荧光探针，对前一步骤的产物进行酶切、接头连接、锚定引物结合、荧光探针连接和荧光信号检测；G.重复步骤F，直至得到待测核酸片段中所需的核苷酸序列信息；其中，M、N均为正整数；所述待测核酸片段含有营养指导基因序列、常规药物相关基因序列或易感基因序列。