利用巴西橡胶树胚性细胞悬浮系建立高效植株再生体系的方法

摘要

一种利用巴西橡胶树胚性细胞悬浮系建立高效植株再生体系的方法，它包括胚性悬浮细胞诱导易碎胚性愈伤组织、易碎胚性愈伤组织继代、体细胞胚状体的分化和植株再生等步骤。本发明工艺流程简单，生产成本低，胚状体诱导率高，植株再生率高，具有很大的应用价值。

主权项

一种利用巴西橡胶树胚性细胞悬浮系建立高效植株再生体系的方法，其特征在于，它包括如下步骤：a、胚性悬浮细胞诱导易碎胚性愈伤组织：用移液枪将巴西橡胶树胚性细胞悬浮系中的培养液吸干，选取小细胞团接种到胚性细胞悬浮系诱导易碎胚性愈伤组织的培养基上，暗培养15～30天，培养温度在25℃～28℃之间，所述诱导易碎胚性愈伤组织的培养基为MS培养基和附加成份，MS培养基中的含量为磷酸二氢钾400～550mg/L、无水氯化钙200～450mg/L、四水硫酸锰20～45mg/L和七水硫酸镁450～650mg/L，附加成分为2,4‑D 0.5～3.0mg/L、6‑BA 0.1～2.0mg/L、NAA 0.5～3.0mg/L、Phytagel 2～3g/L、蔗糖50～90g/L和椰子水30～80ml/L；b、易碎胚性愈伤组织继代：将易碎胚性愈伤组织转入诱导易碎胚性愈伤组织的培养基上继代培养，15～30天继代一次，暗培养，培养温度在25℃～28℃之间；c、体细胞胚状体的分化：将易碎胚性愈伤组织接种于分化培养基，暗培养20～50天，以促进体细胞胚状体的分化、成熟，培养温度在25℃～28℃之间，所述分化培养基为MS培养基和附加成份， MS培养基中的含量调整为磷酸二氢钾400～550mg/L、无水氯化钙200～450mg/L、四水硫酸锰20～45mg/L和七水硫酸镁450～650mg/L，附加成份为6‑BA 0.5～3.0mg/L、KT 0.5～3.0mg/L、NAA 0.01～1.0mg/L、GA3 0.01～1.0mg/L、 Phytagel 2～3g/L、蔗糖50～90g/L、活性碳1～2g/L和椰子水30～80ml/L；d、植株再生：将成熟胚状体接种到出苗培养基，光照培养，以促其再生出完整植株，培养温度在25℃～30℃之间，所述出苗培养基的有效成分为MS培养基和附加成份， MS培养基中的含量调整为磷酸二氢钾400～550mg/L、无水氯化钙200～450mg/L、四水硫酸锰20～45mg/L和七水硫酸镁450～650mg/L，附加成分为KT 0.5～3.0mg/L、NAA 0.01～1.0mg/L、GA3 0.1～3.0mg/L、Phytagel 2～3g/L、蔗糖50～90g/L、活性碳1～2g/L和椰子水30～80ml/L。