桑黄活性多糖的制备方法

摘要

本发明涉及一种桑黄活性多糖的制备方法，对培养基进行优化，在培养基中添加了抗氧化剂、天门冬氨酸、维生素等化学因子对桑黄菌丝体的生长有显著的影响并优化了配方和工艺条件，大大提高了桑黄活性多糖的产率和多糖活性，另外，在培养基中添加了抗氧化剂，克服或缓解了非自然条件下真菌细胞生长和合成活性多糖的胁迫条件，本发明方法简单，副产物少，适用于工业化应用，为后续相关产品的开发奠定了基础。

主权项

一种桑黄活性多糖的制备方法，其特征在于：所述方法包含有以下的步骤：1）菌种活化在改良PDA培养基中接种桑黄菌丝体，25～30℃，有氧避光培养至桑黄菌丝体长满斜面；上述的1L改良PDA培养基中：马铃薯180～200g、葡萄糖10～20g、琼脂20g、抗氧化剂0.5～6g，余量为水，改良PDA培养基的pH为6.5；2）一级种子液培养按照每50ml的种子液培养基中接入3块1cm2的斜面菌种的量，将活化后的斜面菌种接入装有种子液培养基的三角瓶中，25～30℃，摇床培养120～240小时，摇床转速150～180r/min；上述的1L种子液培养基中：马铃薯200～260g、葡萄糖5～30g、KH2PO41g、MgSO4 0.5g、抗氧化剂1～6g、CaCl2 0.1～2g、FeSO4 0.05～0.35g，余量为水，种子液培养基的pH为6.5；3）二级种子液培养将步骤2）所得的菌种按照菌种与种子液培养基的体积比为1：10～15的量接入装有种子液培养基的三角瓶中，25～30℃摇床培养120小时，摇床转速180r/min，得到扩大培养的菌种；4）定向发酵将步骤3）扩大培养的菌种转接入装有定向发酵培养基的发酵罐中，菌种与定向发酵培养基的体积比为1：10～15，保持罐温28～29℃，罐压0.5‑0.7kPa，搅拌速率300～400rpm，通气量为1：0.5～0.7v/v.m，发酵180～220小时，得到发酵液；上述的1L定向发酵培养基中：麦芽粉5～20g、葡萄糖15～100g、FeSO40.1～0.6g、抗氧化剂1～6g、天门冬氨酸0.5～8g、MgSO4 1g、KH2PO4 1～2g、复合维生素0.001～0.05g、吐温801～10g，余量为水，定向发酵培养基的pH为6.5；5）提取桑黄活性多糖将步骤4）得到的发酵液打到减压浓缩器中，浓缩至浓缩液的体积为原发酵液体积 的0.1～0.25倍，转移到贮罐中，经板框压滤，压滤清液浓缩，加入乙醇至乙醇在浓缩清液中的体积浓度达到60%～80％，低温醇析10～20小时，取沉淀物用去离子水溶解，喷雾干燥，得到桑黄活性多糖。