发明名称 |
一种聚乙二醇偶联结合超滤离心分离富集糖肽的方法 |
摘要 |
本发明涉及糖肽的富集方法,具体地说是一种聚乙二醇偶联结合超滤分离富集糖肽的方法;N-连接糖蛋白质经过酶解产生的肽段混合物中加入高碘酸,糖链上的顺式邻二醇经氧化生成醛基,通过反相色谱除盐去除多余的高碘酸;向氧化后的肽段混合物中加入单甲氧基聚乙二醇酰肼(mPEG-Hz),在乙酸-乙酸钠缓冲液中糖肽与聚乙二醇偶联;将反应产物加入超滤离心管样品池中,经过清洗和离心过滤将糖肽和非糖肽分开;糖肽保留在滤膜内,非糖肽离心到滤膜外;向样品池中再加入肽N-糖苷酶F(PNGaseF)的碳酸氢铵缓冲液,酶解后将肽段从其糖基化位点处酶切下来,经过离心即可获得含糖基化位点的肽段。本发明的优点为:是一种普适性的糖肽富集方法,具有较好的选择性,操作步骤简单,非特性吸附的清洗比较容易,成本较低。 |
申请公布号 |
CN102757992A |
申请公布日期 |
2012.10.31 |
申请号 |
CN201110104461.X |
申请日期 |
2011.04.25 |
申请人 |
中国科学院大连化学物理研究所 |
发明人 |
张丽华;侯春彦;杨开广;梁振;张玉奎 |
分类号 |
C12P21/00(2006.01)I;C07K14/00(2006.01)I;C07K9/00(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I |
主分类号 |
C12P21/00(2006.01)I |
代理机构 |
沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 |
代理人 |
马驰 |
主权项 |
一种聚乙二醇偶联结合超滤离心分离富集糖肽的方法,其特征在于:1)N‑连接糖蛋白质经过酶解产生的肽段混合物中加入高碘酸,糖链上的顺式邻二醇经氧化生成醛基,通过反相色谱除盐去除多余高碘酸;2)向氧化后的肽段混合物中加入单甲氧基聚乙二醇酰肼(mPEG‑Hz),在乙酸‑乙酸钠缓冲液中糖肽与聚乙二醇偶联;3)将反应产物加入超滤离心管样品池中,经过清洗和离心过滤将糖肽和非糖肽分开;糖肽保留在滤膜内,非糖肽离心到滤膜外;4)向样品池中再加入肽N‑糖苷酶F(PNGase F)的碳酸氢铵缓冲液,酶解后将肽段从其糖基化位点处酶切下来,经过离心即可获得含糖基化位点的肽段。 |
地址 |
116023 辽宁省大连市中山路457号 |