一种利用三孢布拉氏霉菌发酵制备β-胡萝卜素的方法

摘要

本发明公开了一种利用三孢布拉氏霉菌发酵制备β-胡萝卜素的方法，包括将三孢布拉氏霉菌ATCC14271（+）和ATCC14272（-）活化后，经过种子培养，在优选的发酵工艺条件下按一定的接种量和接种比接入发酵培养基中发酵，最终得到β-胡萝卜素含量较高的菌丝体。采用本发明的方法可以获得成本低、效价高且天然优质的β-胡萝卜素产品。

主权项

一种利用三孢布拉氏霉菌发酵制备β‑胡萝卜素的方法，其特征在于包括如下步骤： （1）菌种活化：在无菌环境下将三孢布拉霉正负菌株分别接种到斜面PDA培养基中，置于培养箱内，28℃培养4d，待三孢布拉霉正负菌株分别长出孢子后，在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面培养基中孢子刮洗下来，并配制成均匀的孢子悬液，使正负菌孢子悬液的浓度分别达到：正菌103个孢子/mL，负菌104个孢子/mL；（2）种子培养：将正负菌分别以孢子悬液的方式接种到种子培养基中，种子培养基装在250mL的三角瓶中，装液量 50mL，培养温度为28℃，转速200 r/min，正菌培养时间为20h，负菌培养时间为24小时，得到三孢布拉霉正负菌株种子液；（3）发酵培养：将达到对数生长期的正负菌种子液按1:5的比例在无菌的条件下混合，再以1%‑10%的接种量接入发酵培养基中培养144‑168h；所述发酵培养基的配制方法为：取40.8克麸皮，加入1000mL自来水，煮沸1h，双层纱布过滤，滤液定容到1000mL得到麸皮浸出液；取100mL麸皮浸出液，加入麦芽糖7.16克、硫酸镁0.04克，大豆粉1克，KH2PO4 0.2克，大豆油1克，VB10.001克，即得；（4）β‑胡萝卜素提取：将发酵培养后的培养物过滤洗清，‑70℃~50℃，恒温真空干燥过夜，得到干菌体，用研磨法粉碎细胞，加入体积比为1：1的丙酮‑石油醚混合液后研磨萃取，直至菌体无色为止，过滤萃取后的上清液，得萃取液，结晶，干燥。