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Método determinativo de la concentración de una sal para eluir en una sola etapa una inmunoglobulina apartir de un material de cromatografía de intercambio catiónico débil, que comprende las dos siguientes etapas:a) etapa uno, que comprende las siguientes subetapasa1) preparar una solución que contenga una inmunoglobulina, una sustancia tampón y opcionalmente una sal;a2) poner en contacto un primer alícuota de la solución que contiene la inmunoglobulina con un material deintercambio catiónico débil que lleva un grupo carboxílico como sustituyente cargado, en unas condiciones quepermiten la fijación de la inmunoglobulina al material de intercambio catiónico débil;a3) recuperar la inmunoglobulina del material de intercambio catiónico débil, usando una solución que lleva unasustancia tampón y una sal, cuya concentración se incrementa linealmente;a4) determinar la concentración inicial de la sal, a la cual la primera fracción de la inmunoglobulina empieza aeluirse de la columna de intercambio catiónico débil;b) etapa dos, que comprende las siguientes subetapasb1) poner en contacto un segundo alícuota de la solución que contiene la inmunoglobulina con un material deintercambio catiónico débil que lleva un grupo carboxílico como sustituyente cargado, en unas condiciones quepermiten la fijación de la inmunoglobulina al material de intercambio catiónico débil;b2) recuperar la inmunoglobulina del material de intercambio catiónico débil, usando un método de elución en tresetapas dondei) la concentración de sal en la primera etapa de elución se calcula como la suma deel producto de la concentración inicial de la sal determinada en la etapa a4) y el número total de cationesmonovalentes diferentes de hidrógeno indicado en la fórmula molecular de la salyel producto de la concentración de la sal tampón y el número total de cationes monovalentes diferentes dehidrógeno indicado en la fórmula molecular de la sal tampón;ii) la concentración de sal en la segunda etapa de elución es el producto de la concentración de sal en laprimera etapa de elución y un factor entre 1,25 y 1,35;iii) la concentración de sal en la tercera etapa de elución es el producto de la concentración de sal en laprimera etapa de elución y un factor entre 1,50 y 1,70;donde los factores de las etapas ii) y iii) se determinan de la manera siguiente: a una concentración inicial entre10 mM y 40 mM los factores son 1,35 y 1,70 respectivamente; a una concentración inicial entre 40 mM y 70 mMlos factores son 1,30 y 1,60 respectivamente, y a una concentración inicial superior a 70 mM los factores son1,25 y 1,50 respectivamente;b3) determinar a cuál de las tres subetapas del método de elución de la etapa b2) se eluye la inmunoglobulina dela columna de intercambio catiónico débil y definir así la concentración de una sal para eluir una inmunoglobulinade un material de intercambio catiónico débil en una única etapa de elución. |
