| 摘要 |
1. Способ получения вирусов гриппа в культуре клеток до значения log10 ТСID50/мл, по крайней мере, приблизительно 8,0 и/или значения log10 БОЕ/мл, по крайней мере, приблизительно 8,0, включающий: ! (a) размножение адгезивных MDCK клеток в свободной от сыворотки культуральной среде на микроносителях, при поддержании одного или более условий культивирования, выбранных из группы, состоящей из: скорости перемешивания от приблизительно 100 до 200 об/мин; значения рН от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,8; температуры от приблизительно 33°С до приблизительно 42°С; и содержания растворенного кислорода (DO) от приблизительно 35% до приблизительно 100%; ! (b) инфицирование размноженных MDCK клеток с помощью вируса гриппа без замены культуральной среды; и ! (c) инкубацию инфицированных размноженных MDCK клеток при условиях, которые позволяют осуществлять репликацию вируса гриппа. ! 2. Способ по п.1, где культуральная среда представляет собой MediV SFM 110. ! 3. Способ по п.1, где концентрация микроносителей составляет от 1 до 3 г/л, и MDCK клетки высевают на микроносители при плотности от 10 до 40 клеток/микроноситель и размножают в течение от 2 до 5 дней. ! 4. Способ по п.1, где MDCK клетки являются такими, полученными от линии клеток, задепонированной в АТСС под депозитным номером РТА-7909 или РТА-7910. ! 5. Способ по п.1, где MDCK клетки размножают до плотности клеток от 5·105 до 3·106 клеток/мл. ! 6. Способ по п.1, где этап (b) осуществляют при использовании вирусного внесения от 0,01·103 БОЕ/мл до 0,05 БОЕ/мл. ! 7. Способ по п.1, где этап (b) осуществляют при использовании вирусного внесения от 0,00001 БОЕ/клетка до 0,00005 БОЕ/клетка. ! 8. Способ по п.1, где вирус гриппа включает один или более сегментов гено |
