皱纹盘鲍基因组DNA的无损伤提取方法

摘要

本发明公开一种皱纹盘鲍基因组DNA的无损伤提取方法，包括以下步骤：用75%酒精对皱纹盘鲍的外套膜进行消毒和刺激，刮取粘液和表皮组织碎片的混合物，并对该混合物经过处理后离心分离取沉淀；在沉淀中加入细胞裂解液；蛋白酶K，经消化、震荡后冷却一段时间；并在样品中加入NH₄Ac，离心取上清液；在上清液中加入异丙醇，震荡混匀后离心取沉淀；所得沉淀用乙醇洗涤，并室温下晒置5分钟，便获得皱纹盘鲍基因组DNA。这是一种简单、高效、便捷，且不会对皱纹盘鲍造成损伤，不影响其存活能力和生产性能的皱纹盘鲍基因组DNA无损伤提取方法。

主权项

1.一种皱纹盘鲍基因组DNA的无损伤提取方法，其特征在于包括以下步骤：a、使用沾有70%-75%酒精的棉球对皱纹盘鲍的外套膜进行消毒和刺激，将处理后的皱纹盘鲍腹面朝上静置，待分泌粘液后，刮取0.1-0.2g粘液和表皮组织碎片的混合物，将该混合物中加入无水乙醇固定，冰上静置5-10分钟后，离心分离，取沉淀；b、所得沉淀中加入细胞裂解液，震荡混匀；c、在上步中获得的混合样品中加入6μl-20μl，5mg/ml-10mg/ml的蛋白酶K，在65℃的条件下消化3-5小时，且每15分钟震荡一次，消化完成后在4℃条件下冷却10-20分钟；d、在冷却后的样品中加入7.5M/L的NH₄Ac，加入的体积为样品总体积的，冰上静置5-10分钟后，4℃条件下离心，取上清液；e、在所得的上清液中加入与其体积相同的异丙醇，充分震荡混匀，冰上静置2-5分钟后，离心取沉淀；f、所得沉淀用70%-75%的乙醇洗涤两次，室温下晒置5-10分钟，获得皱纹盘鲍基因组DNA。