发明名称 |
利用七叶苷和4-MUG从fosmid文库中筛选β-葡萄糖苷酶的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种利用七叶苷和4-MUG从fosmid文库中筛选β-葡萄糖苷酶的方法:(1)从富含纤维素资源的地点采集土样,提取总DNA,构建fosmid文库,获得富集菌液;(2)将富集菌液于含七叶苷的基础培养基中,20~40℃培养12~24h进行初筛,挑取菌落周围呈现黑色的菌株接种至基础培养基中,20~40℃培养12~24h进行复筛,再将4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷的低熔点琼脂糖溶液均匀平铺在复筛平板上,20~40℃培养0.1~1h,紫外灯下观察菌落周围显荧光的,即得所述β-葡萄糖苷酶产生菌株,进而获得β-葡萄糖苷酶的DNA序列;本发明方法筛选时间短,精度高,误差少。 |
申请公布号 |
CN102732597A |
申请公布日期 |
2012.10.17 |
申请号 |
CN201210127162.2 |
申请日期 |
2012.04.26 |
申请人 |
杭州师范大学 |
发明人 |
黄黎锋;李海峰;蓝袁洋 |
分类号 |
C12Q1/34(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N |
主分类号 |
C12Q1/34(2006.01)I |
代理机构 |
杭州天正专利事务所有限公司 33201 |
代理人 |
黄美娟;王兵 |
主权项 |
一种利用七叶苷和4‑MUG从fosmid文库中筛选β‑葡萄糖苷酶的方法,其特征在于所述方法为:(1)从富含纤维素资源的地点采集土样,提取总DNA,构建fosmid文库,获得富集菌液;(2)将富集菌液于含七叶苷的基础培养基中,20~40℃培养12~24h进行初筛,获得菌落周围呈现黑色的菌株;所述含七叶苷的基础培养基的终浓度组成为:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,琼脂粉10~20g/L,七叶苷0.1~1g/L,柠檬酸铁0.1~5g/L,氯霉素10~50mg/L,溶剂为水;(3)挑取步骤(2)获得的菌落周围呈现黑色的菌株接种至基础培养基中,20~40℃培养12~24h进行复筛,获得复筛后的平板;所述基础培养基终浓度组成为:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,琼脂粉10~20g/L,氯霉素10~50mg/L,溶剂为水;(4)取4‑甲基伞形酮‑β‑D‑葡萄糖苷的低熔点琼脂糖溶液均匀平铺在步骤(3)获得的平板上,20~40℃培养0.1~1h,紫外灯下观察菌落,菌落周围显荧光的,即得所述β‑葡萄糖苷酶产生菌株,进而获得β‑葡萄糖苷酶的DNA序列,若无荧光的,即为假阳性菌株;所述4‑甲基伞形酮‑β‑D‑葡萄糖苷的低熔点琼脂糖溶液的终浓度组成为:4‑甲基伞形酮‑β‑D‑葡萄糖苷0.1~1g/L,低熔点琼脂糖1~10g/L,溶剂为水,所述低熔点琼脂糖凝胶温度为24~28℃。 |
地址 |
310036 浙江省湖州市下沙高教园区学林街16号 |