猪流感病毒H1N1亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了猪流感病毒H1N1亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法。根据猪流感病毒A/swine/Shanghai/1/2005(H1N1)毒株HA1的基因序列设计、合成HA1基因，并把该基因克隆入猪痘病毒载体pUSZ11中，得到转移载体pUSZ11/H1。所述的重组病毒是将猪痘病毒和转移载体pUSZ11/H1感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得的阳性克隆。该重组猪痘病毒能稳定表达HA1蛋白，接毒后细胞病变出现规律，种毒的毒价稳定在107TCID50/mL，并能有效地刺激机体的免疫保护反应，能够在制备预防和/或治疗猪流感病毒H1N1亚型感染的药物中应用。

主权项

一种猪流感病毒H1N1亚型HA1基因的转移载体pUSZ11/H1，其特征在于该转移载体是将序列为SEQ ID NO.1所示的猪流感病毒H1N1毒株HA1基因序列插入猪痘病毒载体pUSZ11的BamHI酶切位点所得；其中，所述的猪痘病毒载体pUSZ11通过如下方法构建：以野生型猪痘病毒wtSPV基因组DNA为模板，以一对引物SEQ IDNO.2和SEQ IDNO.3进行PCR，然后用EcoR Ⅰ和Kpn Ⅰ酶切扩增产物，把SEQ ID NO.4所示的LF克隆到pUC19中；以wtSPV基因组DNA为模板，用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6进行PCR，然后用Sal Ⅰ和HindⅢ酶切扩增产物把SEQ ID NO.7所示的RF克隆进上述的pUC19中，形成pUS01质粒；以pSP1质粒为模板，用引物对P11ZS：SEQ ID NO.8和P11ZX：SEQ ID NO.9,把LacZ基因克隆到载体pUS01的BamH Ⅰ和Sal Ⅰ位点间，其余序列为pUC19框架序列，由此形成猪痘病毒载体pUSZ11。