造血祖细胞的制备方法及其专用培养基

摘要

本发明公开了一种造血祖细胞的制备方法及其专用培养基。本发明提供了由人胚胎干细胞或诱导的多潜能干细胞分化制备造血祖细胞的培养基，由细胞培养液I、细胞培养液II、细胞培养液III和细胞培养液IV组成。本发明的实验证明，建立了一个成分明确的，新的逐级诱导人胚胎干细胞分化产生造血祖细胞的体系，这不仅为进一步研究造血干/祖细胞分化产生提供了良好的研究平台，同时由于此分化体系是在无血清，无鼠源的基质细胞等，为获得造血祖细胞应用于临床血液疾病的治疗提供了分化方法。

主权项

由人胚胎干细胞或诱导的多潜能干细胞分化制备如下权利要求9或10中任一所述造血祖细胞的培养基，由细胞培养液I、细胞培养液II、细胞培养液III和细胞培养液IV组成，所述细胞培养液I按照如下方法制备：将Activin A、骨形成蛋白‑4、碱性成纤维生长因子和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述Activin A在所述细胞培养液I中的浓度为1ng/ml‑25ng/ml，所述骨形成蛋白‑4在所述细胞培养液I中的浓度为1ng/ml‑50ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液I中的浓度为10ng/ml‑100ng/ml；所述细胞培养液II按照如下方法制备：将成血管生长因子、碱性成纤维生长因子、B27添加剂和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述成血管生长因子在所述细胞培养液II中的浓度为10ng/ml‑100ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液II中的浓度为10ng/ml‑100ng/ml，所述B27添加剂在所述细胞培养液II中的浓度为0.8％‑1.2％(体积百分含量)；所述细胞培养液III按照如下方法制备：将成血管生长因子、碱性成纤维生长因子、B27添加剂、TGFβ信号抑制剂和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述成血管生长因子在所述细胞培养液III中的浓度为10ng/ml‑100ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液III中的浓度为10ng/ml‑100ng/ml，所述TGFβ信号抑制剂在所述细胞培养液III中的浓度为2‑ng/ml 20uM，所述B27添加剂在所述细胞培养液III中的浓度为0.8％‑1.2％(体积百分含量)；所述细胞培养液IV按照如下方法制备：将干细胞因子、血小板生成素、Flt3‑ligand、白介素‑3、B27添加剂和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述干细胞因子在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml‑200ng/ml，所述血小板生成素在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml‑200ng/ml，所述Flt3‑ligand在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml‑200ng/ml，所述白介素‑3在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml‑200ng/ml，所述B27添加剂在所述细胞培养液IV中的浓度为0.8％‑1.2％(体积百分含量)。