一种丙型肝炎病毒完整囊膜蛋白与GB病毒B的嵌合病毒

摘要

本发明涉及病毒、组合物及其制备或纯化领域，具体涉及一种丙型肝炎病毒完整囊膜蛋白与GB病毒B的嵌合病毒，该嵌合病毒由GB病毒B的5’端非编码区及核心蛋白基因序列、丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因序列和GB病毒B的非结构蛋白及3’端非编码区序列依次连接构成，其中丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因序列是1b基因型丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因序列。该病毒可以通过肝内注射和静脉注射含嵌合病毒的原代狨猴血清成功感染狨猴。该嵌合病毒模拟了丙型肝炎病毒在灵长类动物体内感染及免疫状态，提供了对丙型肝炎病毒完整囊膜蛋白免疫测定及评价的平台，可解决因缺少小型灵长类动物感染模型限制丙型肝炎免疫防治研究与疫苗评价等科学问题。

主权项

一种丙型肝炎病毒完整囊膜蛋白与GB病毒B的嵌合病毒RNA的构建方法，该方法由以下步骤组成：(1)从1b型丙型肝炎病毒血清样本中提取出RNA并RT‑PCR逆转录为cDNA，然后巢式PCR扩增丙型肝炎病毒的完整结构蛋白基因片段并与pMD‑20T载体连接，得到含有丙型肝炎病毒完整结构蛋白基因片段的质粒；其中所述巢式PCR扩增的引物如下：上游外引物序列为SEQ ID NO：2所示的序列；下游外引物序列为SEQ ID NO：3所示的序列；上游内引物序列为SEQ ID NO：4所示的序列；下游内引物序列为SEQ ID NO：5所示的序列；(2)取GB病毒B全基因组的质粒，采用PCR方法从中扩增GB病毒B的完整囊膜蛋白基因上游的NotI‑core和下游NS2‑AflII两基因片段；取步骤(1)所得到的质粒，采用PCR方法从中扩增丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段；其中，扩增GB病毒B的NotI‑core基因片段的上游引物序列为SEQ ID NO：6所示的序列；扩增GB病毒B的NotI‑core基因片段的下游引物序列为SEQ ID NO：7所示的序列；扩增丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段的上游引物序列为SEQ ID NO：8所示的序列；扩增丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段的下游引物序列为SEQ ID NO：9所示的序列；扩增GB病毒B的NS2‑AflII基因片段的上游引物序列为SEQ ID NO：10所示的序列；扩增GB病毒B的NS2‑AflII基因片段的下游引物序列为SEQ ID NO：11所示的序列；将扩增的PCR产物分别进行电泳并凝胶回收目的条带，所得到的三段DNA用Overlapping PCR的方法，按GB病毒B的NotI‑core基因片段、丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段和GB病毒B的NS2‑AflII基因片段顺序进行连接，得重组DNA片段；另取GB病毒B全基因组的质粒用NotI与AflII进行双酶切，回收去除NotI与AflII两位点间含有GB病毒B的完整囊膜蛋白基因片段的DNA片段，并与所述重组DNA片段连接，得嵌合全基因组质粒；(3)将所得嵌合全基因质粒的全基因组序列于SacI位点切断，并以其为模板，由T7RNA聚合酶转录合成嵌合病毒的RNA。