发明名称 |
一种高通量棉花品种DNA指纹库构建方法 |
摘要 |
本发明提供了一种高通量棉花品种DNA指纹库构建方法,该方法包括提取棉花品种DNA,使用40对引物(核苷酸序列如SEQ ID No.1-80所示)进行SSR-PCR扩增,将扩增产物进行荧光多重PCR组合,于DNA分析仪上进行毛细管五色荧光电泳检测,根据荧光图谱进行棉花品种DNA指纹库构建。本发明方法相比常规的聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测效率提高了10倍以上,且通过分子量内标的自动比对获得扩增产物片段大小,减少人为读板误差的同时,最大程度地保证了数据结果的准确性与可靠性。 |
申请公布号 |
CN102732973A |
申请公布日期 |
2012.10.17 |
申请号 |
CN201210170015.3 |
申请日期 |
2012.05.28 |
申请人 |
中国农业科学院棉花研究所 |
发明人 |
匡猛;杨伟华;许红霞;王延琴;周大云;冯新爱;方丹 |
分类号 |
C40B50/06(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C40B50/06(2006.01)I |
代理机构 |
北京路浩知识产权代理有限公司 11002 |
代理人 |
王朋飞;王加岭 |
主权项 |
一种高通量棉花品种DNA指纹库构建方法,其特征在于,包括以下步骤:1)提取棉花DNA;2)使用分布于棉花全基因组26条染色体上的一套40对核心引物分别对待测品种进行SSR‑PCR检测,每对引物标记有荧光染料,所述核心引物的核苷酸序列如下所示: 引物名称 上游序列5′‑3′ 下游序列5′‑3′ NAU3254 GCTTTGCTTTGGAATGAGAT TTGGTGCAGATAGCAAGAAA NAU2277 GAACTAGCCACATGATGCAC TTGTTGAGGCATTAGTTTGC NAU1190 CCATGTCCGTATCCATGTTA TAAGGCAAGATAGGGTCAGG NAU1071 ACCAACAATGGTGACCTCTT CCCTCCATAACCAAAAGTTG MUCS101 AGCCTCTCTCTCCTTCAGGC GAGTCATATCGCTTGGGAGC NAU934 TGCTTTCGTATCCTTTTTCC ATTAGAGAAGCCAGGGAGGT NAU1200 CAACAGCAACAACCACAA CTGCCTCGAGGACAAATAGT NAU874 AAATGGCGTGCTTGAAATAC TGTGATGAAGAACCCTCTCA NAU905 TGGCTGAACTTTGCAATTTA AAGCAAGGGAGGTAATCCTT NAU1362 TCTGATTTGCTGATTGGAAA CTTATTCGGACTTGGTTGCT BNL1317 AAAAATCAGCCAAATTGGGA CGTCAACAATTGTCCCAAGA BNL2960 TAAGCTCTGGAGGCCAAAAA CCATTTCAATTTCAAGCATACG BNL1231 TAATAAAAGGGAAAGGAAAGAGTT TATGGCTCTAGAATATTCCCTCG BNL3442 CATTAGCGGATTTGTCGTGA AACGAACAAAGCAAAGCGAT BNL3261 AAACGGAAACGAAGAAGGGT CCCAAACCTGTCTCACCAAC BNL1421 TGAAGATTTGGAGGCAATTG GAAATCAAGCCTCAATTCGG BNL2449 ATCTTTCAAACAACGGCAGC CGATTCCGGACTCTTGATGT CIR246 TTAGGGTTTAGTTGAATGG ATGAACACACGCACG NAU2437 CTTGGAAAAAGGAAGAGCAG TTAAAAGACCAAAGGCAAGG BNL830 TTCCGGGTTTTCAATAAACG GTTAATACTTTTTTTCTTTTGTGTGTG JESPR292 GCTTGCAATCTCCTACACC GAATATGTTTCATAGAATGGC NAU1167 CTGACTTGGACCGAGAACTT AAGAGCCCTGGACAATGATA NAU1028 CCGCCTAAGACTAATTGGAA CAAATTGTAAGTGGCTGAGA CIR216 ATCTGAACCATCATCCTC TTCTGATTGGCACTTTC NAU3110 CCAAGGATATGAACCAAAGG CGTGAACACCATGTCAGTCT BNL3646 CCCAATACGAGGAGAGCACA TCGAAAATGGGGGAGAGAG BNL3171 GAAAAATTGAGGAAGGACATACG GGCCACAACCGAATTTACTG NAU1103 GGAGCCAGAAGTTGAGAAAA TTCGGCTTCTGCTTTTACTT BNL4030 CCTCCCTCACTTAAGGTGCA ATGTTGTAAGGGTGCAAGGC BNL3140 CACCATTGTGGCAACTGAGT GGAAAAGGGAAAGCCATTGT JESPR110 GGCGAAGAGCTACCTGTGAATGGC CCAATGGGGACTCTACATGTGGC NAU1125 AAGAAGCCACTGAAGCAGAG GTAGAACAGCTCCATTGCTG BNL827 AAGCTCCACGTGCTCAAGTT CTCATGTTGTCGGTGGTGTT NAU3588 CCCCATAGGGCATACTTCTA GCCAACAAGAACAACAACAC CIR170 TCGGTAAAGATGGGTG ATTGGTGCTGGTTGAG NAU1369 TGGCAGAGATGAATGTAAGC GGTAACGGATGGAAAATCAC NAU859 CAGGCTTCATCTTTTTGGAC CATTGGATCCTAGTGGGAAG NAU3778 GAGAAGCAGCCACTCATGTA CCCCACCCTATGATGAATAA DPL0442 TTACGGTGGCTAATGTAATATCCC ATTCTTGAGAGTTCACCAGGAAAG NAU5099 GCTGTGAGTTTGTGCTTTCC GACAGAACTCTGGAGCGAAT ;3)将步骤2)每对引物的扩增产物进行荧光多重PCR组合,然后进行毛细管电泳检测与数据分析。 |
地址 |
455000 河南省安阳市开发区黄河大道西段38号 |