噬菌体抗体库的构建方法及应用此库筛选到的抗CD6抗体

摘要

本发明公开了一种构建高度多样性的大容量天然人源Fab噬菌体抗体库的方法，采用DNA重组技术从15位健康志愿者外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链和重链可变区基因，分别插入噬菌体载体PFK-1，PFL-6相应的位置，建立高容量、高多样性的天然人源Fab噬菌体抗体库，该方法建立的kappa链Fab抗体库容量为2.85×108，lambda链Fab抗体库容量为2.9×108，符合大容量体抗体库的标准，且包含几乎覆盖人抗体的全部轻链和重链可变区基因，具有高度的多样性。该抗体库主要用来高通量筛选临床治疗用的低抗原性和高亲和性人源抗体。使用该抗体库，筛选出一株抗CD6的单克隆抗体。

主权项

一种天然人源Fab噬菌体抗体库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）构建噬菌体展示Fab抗体的噬粒载体PFK‑1，PFL‑6；（2）人外周血淋巴细胞的分离及总RNA的提取，通过RT‑PCR合成cDNA；（3）以cDNA为模板，然后采用一组几乎覆盖人抗体全部重链或轻链可变区编码序列的特异性引物进行PCR反应，扩增轻链kappa，lambda和重链可变区基因；（4）将轻链kappa链和lambda链可变区基因分别与噬粒载体PFK‑1，PFL‑6连接，构建kappa链，lambda链轻链抗体库；（5）将重链VH片段基因与噬粒载体PFK‑1连接，收集所有克隆质粒的DNA，构建重链抗体库；（6）将重链可变区基因从重链抗体库DNA中切出，分别与轻链kappa库DNA连接和轻链lambda库DNA连接得到完整的抗体库DNA；（7）进行天然人源Fab噬菌体抗体库的多样性分析。