正痘病毒产生和纯化方法

摘要

本发明涉及一种产生和纯化野生型、减毒和/或重组正痘病毒的方法。本发明涉及通过本发明方法获得的纯化的野生型、减毒和/或重组正痘病毒和用于治疗和/或预防癌症、传染病和/或自身免疫病的包括所述纯化正痘病毒的药物组合物(优选疫苗)及其用途。本发明还涉及获自属于鸭科的禽类细胞的永生化禽类细胞系(具体来说是包括编码端粒酶逆转录酶(TERT)的核酸序列和任选存在的E1A核酸序列的番鸭永生化禽类细胞系)根据本发明的方法用于产生野生型、减毒和/或重组正痘病毒的用途。

主权项

一种产生和纯化野生型、减毒和/或重组正痘病毒的方法，包括下列步骤：a)制备包装细胞培养物；b)用正痘病毒感染包装细胞培养物；c)培养感染的包装细胞直至产生子代正痘病毒；d)在一或多种核酸酶存在下温育；e)从培养上清液和/或包装细胞回收正痘病毒；f)在合适条件下将一价盐添加到步骤e)回收的正痘病毒中以抑制核酸酶活性并避免步骤g)中所述正痘病毒吸附到阴离子交换吸附剂上；g)在合适条件下将步骤f)获得的混合物与阴离子交换吸附剂接触以捕获核酸；h)在合适条件下将步骤g)获得的混合物净化以去除细胞碎片；i)在合适条件下用包括一价盐的溶液清洗阴离子交换吸附剂以回收流过物中剩余的正痘病毒；j)浓缩步骤h)获得的流过物和步骤i)获得的流过物；k)将步骤j)获得的包括正痘病毒的级分渗滤。