一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基及方法

摘要

本发明公开了一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基及方法，所述无血清培养基含有基础培养基、添加物，所述添加物包括转铁蛋白、β-巯基乙醇、胰岛素、牛血清白蛋白、肝素钠、生长因子VEGF-C等。诱导分化方法为将肿瘤干细胞与基底膜BME混合后，添加无血清培养基培养15～30天。本发明的无血清分化诱导培养液中添加了VEGF-C，对诱导肿瘤干细胞向淋巴管的发育和形成过程中起着决定性作用。本发明的诱导分化方法操作简便，不需对细胞进行复杂的处理，不会对细胞造成物理的、化学的损伤，适用范围广。

主权项

一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基，所述无血清培养基含有基础培养基、添加物，所述添加物含有的组分和用量为：转铁蛋白 3.6～5.8mg/L、β‑巯基乙醇 0.52～0.88mg/L、胰岛素 1.6～12.8mg/L、牛血清白蛋白 450～600mg/L、肝素钠 50～200µg/L、血管内皮细胞生长因子C 20～100µg/L、谷丙氨酸二肽400～460mg/L、L‑抗坏血酸‑2‑磷酸三钠盐9.5～12.5mg/L、氨基乙醇0.48～1.1mg/L、亚硒酸钠0.0017～0.002mg/L、油酸88～126mg/L，所述基础培养基含有的组分和用量为：胸苷0.315～0.385mg/L、葡萄糖 3000～3300mg/L、次黄嘌呤1.88～2.2mg/L、酚红钠 8.18～8.98mg/L，所述基础培养基还含有如下组分和用量中的至少一种氨基酸：谷丙氨酸二肽400～460mg/L、丙氨酸4～5mg/L、精氨酸134～155mg/L、天冬酰胺6.5～8.2mg/L、天冬氨酸6.5～7.5mg/L、半胱氨酸16.1～18.3mg/L、胱氨酸30～35mg/L、谷氨酸7.0～8.0mg/L、谷氨酰胺335～450mg/L、甘氨酸16～19mg/L、组氨酸31～33mg/L、异亮氨酸52.3～56.6mg/L、亮氨酸55.5～60mg/L、赖氨酸90.8～96.5mg/L、甲硫氨酸16.5～18.5mg/L、苯丙氨酸33.25～37 .75mg/L、脯氨酸16.5～18.5mg/L、丝氨酸24.8～27.6mg/L、苏氨酸51.25～55.45mg/L、色氨酸8.5～9.6mg/L、酪氨酸54.35～57.25mg/L、缬氨酸50.55～55.75mg/L，所述基础培养基还含有如下组分和用量中的至少一种维生素：生物素0.003～0.004mg/L、氯化胆碱7.8～9.5mg/L、叶酸2.2～2.76mg/L、肌醇11.28～13.46mg/L、腐胺0.078～0.082mg/L、泛酸钙1.9～2.3mg/L、盐酸吡哆醛1.9～2.2mg/L、盐酸吡多醇 0.03～0.033mg/L、核黄素0.2～0.25mg/L、盐酸硫胺1.9～2.3mg/L、维生素B12 0.6～0.72mg/L、烟酰胺1.9～2.1mg/L，所述基础培养基还含有如下组分和用量中的至少一种盐类：氯化钙110～120mg/L、氯化钠6800～7000mg/L、氯化钾280～320mg/L、磷酸二氢钠50.5～55.5mg/L、磷酸氢二钠70～75mg/L、丙酮酸钠200～230mg/L，所述基础培养基还含有如下组分和用量中的至少一种微量元素：硫酸铜0.001～0.0015mg/L、硝酸铁0.045～0.065mg/L、硫酸亚铁0.38～0.42mg/L、氯化镁58.2～62.8mg/L、硫酸镁48～51mg/L、硫酸锌0.4～0.5mg/L，所述基础培养基还含有如下组分和用量中的至少一种脂类：亚油酸0.038～0.044mg/L、硫辛酸0.098～0.146mg/L，所述基础培养基还含有如下组分和用量中的至少一种缓冲液：碳酸氢钠1900～2300mg/L、HEPES 4553.6～4868.2mg/L。