利用双向电泳技术获得刺参性腺蛋白质二维电泳图谱的方法

摘要

本发明公开了一种利用双向电泳技术获得刺参性腺蛋白质二维电泳图谱的方法，步骤如下：刺参性腺总蛋白质的制备；对上述蛋白质含量测定；双向电泳；染色；拍照得二维电泳图谱。本发明的利用双向电泳技术获得刺参性腺蛋白质二维电泳图谱的方法，具有好操作、容易控制的优点，根据本发明所获得的刺参性腺蛋白质二维电泳图谱为刺参性别决定机制及繁殖育种工作提供技术条件和平台，进而提高刺参产业的经济效益和社会效益。

主权项

1.一种利用双向电泳技术获得刺参性腺蛋白质二维电泳图谱的方法，其特征在于步骤如下：a、刺参性腺总蛋白质的制备取刺参性腺并在液氮的低温中将组织研磨成粉末，利用三氯醋酸丙酮法对粉末状组织进行裂解处理，得到刺参性腺可溶性蛋白质；b、对上述蛋白质含量测定采用标准蛋白质定量试剂盒，用酶标仪测定吸光度值，其中包括标准管、测定管和空白管的各个吸光度值，然后用公式计算蛋白质含量；所述的公式为：蛋白含量 g/L=×测定分装后在–80℃的条件下保存备用；c、双向电泳等电聚焦：取上述备用的蛋白质在冰上融化按雌、雄分别设置上样量，配置等电聚焦胶条后置于等电聚焦仪进行聚焦电泳；IPG胶条的平衡：将等电聚焦的胶条置于平衡液中进行平衡；SDS-PAGE电泳：分别采用6%的浓缩胶和12%的分离胶进行不连续SDS-PAGE垂直电泳，平衡后将胶条转移到SDS凝胶上，调整胶条位置使其与SDS浓缩胶充分接触，并排出其间气泡，开始电泳；d、染色将凝胶置于染色容器内，采用硝酸银染色法对凝胶进行染色；e、拍照得二维电泳图谱。