高赖氨酸蛋白基因SB401表达载体的构建方法及其应用

摘要

本发明涉及高赖氨酸蛋白基因Sb401表达载体的构建与应用。旨在解决将外源高赖氨酸蛋白基因导入植株中并高效并高效表达的技术难题。该方法将采用提取马铃薯的RNA，通过反转录获得马铃薯全长CDNA，用PCR方法获得sb401基因，并将该基因重组后克隆到植物双元表达载体中；通过农杆菌介导方法将该基因导入玉米基因组，并获得表达转基因阳性苗，并高效表达，可以提高玉米赖氨酸的含量，进而提高玉米的品质；本发明方法费用低、拷贝数低、重复性好、基因沉默现象少、同时具有转育周期短及能转化较大片段等独特优点。

主权项

一种高赖氨酸蛋白基因Sb401植物表达载体的构建方法，包括以下步骤：（1）提取马铃薯花粉高赖氨酸基因Sb401 总RNA，并逆转录成cDNA；（2）以上述 cDNA为模板，以特异引物克隆具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的马铃薯高赖氨酸基因Sb401 ，所述特异引物序列如下：上游引物F1:5'‑ggatccttttctttttgcaagttcctcc‑3'；下游引物R1:5'‑gagctcaaagaaatccccaaaagaaag‑3'；（3）将马铃薯高赖氨酸基因Sb401 与亚克隆载体pGSI连接，再将连接产物转化E.Coli JM109感受态细胞，构建马铃薯高赖氨酸基因Sb401 亚克隆载体质粒；（4）将上述克隆质粒构建到植物表达载体pCAMBIA1300，获得含高赖氨酸基因Sb401 片段重组表达载体CUB‑ Sb401 。