发明名称 |
甘薯茎尖的包埋玻璃化超低温保存方法 |
摘要 |
本发明涉及一种甘薯茎尖的包埋玻璃化超低温保存方法,以甘薯品种的甘薯苗为材料,无需预培养将其茎尖进行包埋。在不同浓度的蔗糖MS溶液中进行包埋后预培养,在玻璃化溶液脱水处理90-120分钟,超低温冷冻保存;冷冻后的恢复培养,不经过愈伤组织直接出芽形成完整的小植株,可以进行大量的无性繁殖。本方法所用材料来源于国内甘薯品种,操作简单,长期冻存后材料恢复生长快。 |
申请公布号 |
CN101904305B |
申请公布日期 |
2012.10.03 |
申请号 |
CN201010228497.4 |
申请日期 |
2010.07.16 |
申请人 |
山东省农业科学院作物研究所 |
发明人 |
王庆美;侯夫云;张立明;李爱贤;张海燕;解备涛;董顺旭 |
分类号 |
A01N3/00(2006.01)I |
主分类号 |
A01N3/00(2006.01)I |
代理机构 |
济南金迪知识产权代理有限公司 37219 |
代理人 |
宁钦亮 |
主权项 |
一种甘薯茎尖包埋玻璃化超低温保存方法,所述甘薯品种为济薯18或济徐23;步骤如下:(1)从甘薯的试管苗上取1~1.5mm甘薯茎尖;将甘薯茎尖移入到浓度为3g/100ml的海藻酸钠和0.2M甘油的无钙离子的MS溶液中,室温浸泡5~20秒;(2)将含有11.1g/L CaCl2、2M甘油、0.2M蔗糖的MS溶液在冰块中预冷15~25分钟,将步骤(1)的甘薯茎尖连同浸泡溶液一起加入其中,形成直径为0.5‑0.8cm甘薯茎尖小球;将甘薯茎尖小球依次移入以下预培养基中进行预培养:将小球移入盛有50ml预培养基I溶液的三角瓶中,预培养基I溶液配方为:MS+30g/L蔗糖+1g/L酪蛋白氨基酸,摇床培养24小时,25~28℃,60~90rpm;将小球移入盛有50ml预培养基II溶液的三角瓶中,预培养基II溶液配方为:MS+0.3M蔗糖,摇床培养16小时,25~28℃,60~90rpm;将小球移入盛有50ml预培养基III溶液的三角瓶中,预培养基III溶液配方为:MS+1.6M蔗糖+2M甘油,摇床培养3小时,25~28℃,60‑90rpm;制得预培养好的甘薯茎尖小球;(3)将上述预培养好的甘薯茎尖小球移入盛有20ml PVS玻璃化溶液的三角瓶中,25℃培养90~120min;所述PVS玻璃化溶液组成为:MS+30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4M蔗糖,pH 5.8;百分比是质量体积比,单位:g/ml;(4)将步骤(3)处理过的甘薯茎尖小球移入2ml规格的超低温管中,每个管中装8‑10个小球,置入液氮中冷冻保存。 |
地址 |
250100 山东省济南市历城区桑园路28号 |