发明名称 |
一种利用人体废弃胚胎建立人胚胎干细胞系的方法 |
摘要 |
本发明涉及一种利用人废弃胚胎建立人胚胎干细胞系的方法,可有效解决现有人胚胎干细胞的建立方法操作复杂,需要大量的胚胎,成本高,成功率低,人胚胎干细胞系远不能满足应用的需要的问题。解决的技术方案是,收集并培养废弃胚胎,分别制备小鼠胚胎成纤维细胞和小儿包皮成纤维细胞,按照0.55~0.65×105个/cm2的密度,混合上述细胞制备成混合饲养层,采用机械法分离废弃胚胎的内细胞团,将分离的内细胞团置于混合饲养层上培养,建立人胚胎干细胞系。本发明操作简单,可以有效利用临床上大量废弃的新鲜及冷冻胚胎,并利用最佳铺皿密度,节约了饲养层细胞,大大降低了建立胚胎干细胞系的成本,为将来开发利用胚胎干细胞奠定了基础。 |
申请公布号 |
CN102703381A |
申请公布日期 |
2012.10.03 |
申请号 |
CN201210221563.4 |
申请日期 |
2012.06.30 |
申请人 |
郑州大学第一附属医院 |
发明人 |
孙莹璞;王芳;孔慧娟;李婧;戴善军;辛志敏;金海霞;宋文妍;姚桂东 |
分类号 |
C12N5/0735(2010.01)I |
主分类号 |
C12N5/0735(2010.01)I |
代理机构 |
郑州天阳专利事务所(普通合伙) 41113 |
代理人 |
聂孟民 |
主权项 |
一种利用人废弃胚胎建立人胚胎干细胞系的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)收集并培养废弃胚胎:收集新鲜的废弃胚胎或对冷冻的胚胎进行解冻,按照常规方法进行培养;(2)饲养层细胞的制备:按照常规方法分别制备小鼠胚胎成纤维细胞和小儿包皮成纤维细胞;(3)混合饲养层的制备:分别收集步骤(2)中制备的小鼠胚胎成纤维细胞和小儿包皮成纤维细胞,分别经磷酸缓冲液漂洗,丝裂霉素C处理后,得到小鼠胚胎成纤维细胞或小儿包皮成纤维细胞的细胞悬液;按照细胞个数1:1的比例混合小鼠胚胎成纤维细胞或小儿包皮成纤维细胞,得混合细胞悬液,按照0.55~0.65×105个/cm2的密度,将上述混合细胞悬液均匀铺在明胶包被的培养皿中;培养皿放入35~38℃、体积浓度为4~6%的CO2培养箱中,培养12~14h即得混合饲养层; (4)人胚胎干细胞系的建立:采用常规的机械法分离步骤(1)所得的废弃胚胎的内细胞团,将分离的内细胞团置于步骤(3)所得的混合饲养层上培养,建立人胚胎干细胞系。 |
地址 |
450052 河南省郑州市二七区建设东路50号 |