自组装聚合分支DNA探针的制备方法

摘要

本发明涉及一种自组装聚合分支DNA探针的制备方法。将常规探针高密度固定于芯片上可提高探针的杂交检测效率，但目前分支状DNA探针的制作操作复杂，制造成本高。本发明将互补探针溶于交联缓冲液中，加热变性降至室温静置，紫外光交联使互补结合的探针间形成共价结合，从而形成稳定的自组装聚合分支DNA探针；交联缓冲液配制方法为：将1.0g精氨酸和20g聚乙二醇1000溶解于0.1mol/L、700mL的PBS中，PBS的pH为7.2，然后用PBS定容至1L。本发明制备方法简捷快速、制备成本低，可有效提高芯片检测的灵敏性，交联缓冲液加精氨酸后所获探针杂交检测灵敏度提高10倍。

主权项

自组装聚合分支DNA探针的制备方法，其特征在于：由以下步骤实现：步骤一：于内表面硅烷化处理的eppendorf管中，将探针结构分别为5’‑α‑β‑γ‑3’和5’‑γ‑α’‑β’‑ 3’的两种探针各10 μmol/L等摩尔浓度溶于交联缓冲液中；其中，探针捕获序列γ区与DNA靶序列互补，α区与α’区互补，β区与β’互补；步骤二：将溶有探针的交联缓冲液加热至80℃‑94℃变性1min，然后自然降至20℃‑25℃，放置5‑10min，使探针互补形成由氢键连接的分支探针链；步骤三：采用波长为254nm 、光强为100μJ/cm2的紫外光处理，紫外光交联3‑4min使溶液中互补结合的探针间形成共价结合，从而形成稳定的自组装聚合分支DNA探针。